8. 임상미생물 검사실의 안전 1장. 임상미생물 검사실의 조직과 주요업무 학습목표 멸균의 종류와 멸균법 ( 고압증기멸균, 여과멸균, 건열멸균, 화염멸균) 고압증기멸균의 정도관리 고압증기멸균과 여과멸균 및 Bacticinerator 방법

1. 멸균의 종류와 멸균법

건열(dry heat) 1) 건열멸균법(dry heat sterilization) - dry oven에서 170 ~ 180℃의 고열로 60 ~ 90분 동안 멸균. - 시험관, 플라스크, 페트리디쉬 등과 같은 유리기구의 멸균에 사용. - 건열을 이용하기 때문에 멸균 후에도 기구가 젖지 않는다. 습열 멸균 장치에 건조 기능이 있어 대신 이용하는 경우가 많다. 2) 화염멸균법(flaming sterilization) - burner 또는 알코올램프의 화염을 이용하여, 미생물을 화염으로 직접 태워 멸균 하는 방법. - 대상은 백금이, 핀셋, 시험관 또는 삼각플라스크와 같은 용기의 입구 등. - 백금이는 화염에 비스듬히 세워서 백금선(또는 니크롬선)이 빨갛게 달구어 질 때 까지 한다.

< 전열기구를 이용한 백금이의 멸균 > ; Bacticinerator 방법

2. 습열(moist heat) 1) 자비멸균법(sterilization by boiling) - 완전한 멸균은 기대하지 못하나, 가장 간편한 방법. 병원체는 일반적으로 62~65℃로 30분간 끓이면 죽는데, 이와 같이 끓는 물속에서 살균하는 방법. 끓일 때에 1%의 탄산나트륨(Na2Co3)을 넣으면, 살균력이 증가되며, 금속류에 녹이 스는 것(부식)을 억제. 2) 저온살균법(pasteurization) 열에 감수성이 큰 식품인 우유나 파괴되기 쉬운 식품에 포함된 미생물을 제거하는 데 사용하는 방법. [저온 살균 법 63~65℃에서 30분정도],[고온 단시간 살균법72~72℃에서 15초] [초고온 순간 가열법 130~150℃에 0.5~5초간살균] 3) 간헐멸균법(intermittent tyndallization) - 100℃이상에서 파괴되는 미생물을 멸균할 때 사용하며, - 100℃로 하루에 한번 30분씩 연속 3회에 걸쳐 간헐적으로 멸균 하는 방법. - 시간이 많이 소요되고, 불편하여, 요즈음은 거의 사용하지 않는다.

3. 고압증기멸균법(steam sterilization) 고압증기 멸균기계 autoclave는 압축된 증기법으로 물품을 멸균하는 기계로서, 기기 안의 압력이 15pound로 증가하면 250℉(121℃)까지 상승. autoclave에 의한 고열은 대부분의 세균을 즉시 사멸시키며 저항력이 강한 아포 형성 세균도 20분 내에 사멸. - 온도에 대해 가장 저항력을 가진 Bacillus stearothermophilus를 대조균으로 사용. 멸균 물품은 손상되지 않고 포화증기를 잘 견딜 수 있는 물품이며, 고압증기멸균 조건은, 121℃, 15pound, 15~20min 이다. * 멸균 상태의 확인 - 기계적 감시: 멸균 과정의 온도와 압력 변화를 기록 - 생물학적 감시자: 아포 형성균인 Bacillus를 이용 - 화학적 지시자: 종이 테이프 이용

4. 가스멸균 멸균제를 가스 상태나 분무상태로 분무시켜 미생물을 멸균 시키는 화학적 살균방법 주사기나 고형재료, 기구, 장치, 식품 및 밀폐 공간 등에 존재하는 미생물을 사멸. 1) Ethylene oxide (E.O gas) - 액체상태의 살균제와 같이 작용은 신속하지 못하지만 광범위한 미생물에 대하여 수용액 상태나 가스 상태에서도 살균작용. - 열에 약한 제품 멸균 시 이용하나, 피부손상이나 점막을 자극. - 환경오염을 막기 위해서는 멸균 공정 완료 후 공기 치환을 충분히 시킨다. 2) Propylene oxide (P.O gas) - 미생물에 대해 광범위한 살균력을 가지고 있으나, 세균 포자에 대해서는 살균력이 약하다. - 곰팡이, 효모, 무포자 세균 살균에 이용하며, E.O gas 보다 살균력은 약하나 잔류 독성은 적다. - 60% 이상 고습에서 살균력이 크다. 3) Methyl bromide (M.B gas) - 주로 살충제로서 광범위하게 이용하며, 살균력은 E.O gas의 1/10 이다. - 공기보다 3배 무겁고, 눈을 강하게 자극하고, 호흡장애를 유발. - 폭발한계가 좁아 발화가 쉽다.

5. 여과 멸균법 - 박막 여과 장치를 이용하는 방법으로, 열에 의해 파괴될 수 있는(효소 제제나, 이열성 화학물질, 배지 등)에 사용. - 셀룰로오즈 아세테이트 같은 여과막을 사용하며, 세균제거용 여과막의 직경은 0.22㎛ 정도. 6. 자외선(ultraviolet, UV) 살균법 자외선(200-380 nm) 영역 중 265 nm가 가장 강력한 살균효과, 증기상태의 수은 전류 통하여 인위적으로 만들어 내는 253.7 nm 이용 - 핵산의 염기인 purine, pyrimidine의 구조 변화 → 핵산 기능 마비 - γ-선, X-선: 초단파의 전자기선(electromagnetic ray), 물질을 이온화 - 배지 구성 성분, 생물세포 구성 물질 → 활성 이온 생성 → 생명작용 파괴 - 방사선 동위원소 Co60, Ce137 → γ-선 : 식품공업, 의약품 제조업, 의료기기업에서 사용 7. 소각 멸균법 - 병원체를 불꽃에 태워버리는 방법으로 안전한 방법. - 수술한 적출물, 법정전염병으로 죽은 가축이나 전염병으로 인해 오염된 물품도 처리.

정리 합시다!!

2. 고압증기멸균의 정도관리

기계적 멸균확인(Mechanical indicator) 멸균과정 동안의 진공, 압력, 시간, 온도를 측정 멸균기의 차트나 출력물을 확인하는 것 멸균기에 부착된 계기판과 기록지로 기계가 정상적으로 작동하는지 확인

생물학적 표지자(Biological indicator) 생물학적표지자 고압증기멸균 : Geobacillus stearothermophillus EO gas 멸균/ 건열 멸균 : Bacillus atrophaeus 방법 멸균 과정이 끝나면 테스트 팩에서 표지자를 꺼냄 BI test 스팀멸균용 : 57±3℃, 1시간(Steam Gravity Cycle) 또는 3시간(Vacuum Cycle) EO멸균용 : 37±3℃, 4시간 건열용 : 36℃±3℃, 24시간 같은 상자 안에 들어 있는 BI를 대조군으로 멸균하지 않고 배양 결과 No growth : 표지자의 색깔이 멸균 전과 동일 Growth : 표지자의 색깔이 Yellow, Turbid로 변화

생물학적 표지자(Biological indicator)

3. 고압증기멸균과 여과멸균 및 Bacticinerator 방법

검체 처리 모든 검체는 Biological Safty Cabinet 내에서 해야한다. Electric cinerator 사용 액체류는 일회용 플라스틱 파이펫, 자동파이펫 사용 액체류 혼합, vortexing 시 튜브는 반드시 뚜껑이 있거나 parafilm으로 막아서 사용한다.