조직배양기술 (Tissue culture technology) 박 종 철 연세대학교 의과대학 의학공학교실 Jong-Chul Park Department of Medical Engineering, Yonsei University College of Medicine, Seoul, KOREA

조직배양 (Tissue culture) 정의 조직배양 세포배양 생체의 일부를 떼어내어, 적절한 배지를 포함한 배양기 안에서 생육시키는 기술 조직배양 기관배양 (Organ culture) 세포배양 (Cell culture) 세포배양 Monolayer culture : 부착 • 단층 배양 Suspension : 혈액계 세포 http://www.cellbiocontrol.com

세포 및 조직배양에 필요한 기기 무균실 • Clean bench 멸균기 (Autoclave) 배양기 (CO2 incubator) 증류수 제조장치 (DW • DI) 원심분리기 (세포분리 : 500 ~ 3,000 rpm) 현미경 (도립현미경) Glass ware : Pipettee (Mass, Pasteur), Flask, Bottle, Centrifuge tube … Plastic ware : Petri dish, Well plate … http://www.cellbiocontrol.com

멸균법 (Sterilization methods) 종별 방법 내용 가열법 가스법 조사법 약액법 여과법 고압증기법 건열법 방사선법 자외선법 고주파법 115°C (30분) 121 °C (20분) 126°C (10분) 135 ~ 145°C (3 ~ 5시간) 160 ~ 170°C (2 ~ 4시간) 180 ~ 200°C (0.5 ~ 1시간) Ethylene Oxide 60Cr 또는 137Cs의 γ-ray 전자선 파장 254nm 주파수 915 or 2450kHz Ethanol (70%), Phenol Pore size 0.2 or 0.45um http://www.cellbiocontrol.com

세포 및 조직 배양용 배지 배양세포 : 종속영양체 (Heterotroph) 배지의 조건 배지 제조용 증류수 : DI & DW 세포증식에 필요한 영양분, 미량성분 (일반적으로 혈청과 같은 천연물 첨가) 배지 제조용 증류수 : DI & DW 배지의 종류 천연배지 (Natural media) 혈장 (plasma) 혈청 (serum) : Lot No.에 따라 차이 큼 Yeast extract Bacto-pepton, skim milk 부착인자 (fibronectin, collagen) http://www.cellbiocontrol.com

세포 및 조직 배양용 배지 배지의 종류 합성배지 (Synthetic media) MEM, RPMI 1640, Ham’s F-10, F-12 등 증식배지 (Growth media) 세포의 영양요구성, 실험내용, 가격, 입수 용이성 일반적으로 FBS 또는 CS를 5 ~ 10% 첨가 부착성 세포 : MEM, Ham’s F-12 부유계 세포 : RPMI 1640 유지배지 (Maintenance media) 증식은 안하며, 세포의 대사 유지가 필요한 경우 혈청량을 1/2 ~ 1/10 정도로 낮춤. http://www.cellbiocontrol.com

세포 및 조직 배양용 시약류 염류용액 (Balanced salt solution, BSS) pH 지시약 Hanks solution Earle solution Phosphate buffered saline (PBS) pH 지시약 0.2% Phenol red 조직으로부터 세포 분리용 효소 Trypsin Dispase (세균유래 중성 protease) http://www.cellbiocontrol.com

혈청 (Serum) Hormone 또는 성장인자의 공급원 물에 불용성 또는 난용성 물질의 용해성 개선 (지방산) 표면에 대한 접착성 개선 FBS (Fetal bovine serum) CS (Calf serum) HS (Horse serum) 혈청배양 10% 전후의 혈청 첨가 세포의 증식 • 분화의 완전제어 불가능 세포가 분비하는 미량물질 정제를 방해 대량 배양시의 경제성 문제 무혈청배양 http://www.cellbiocontrol.com

세포의 계수 Cell counter Haematocytometer (혈구계산판) http://www.cellbiocontrol.com

배양세포의 보존 계대(transfer)의 반복으로 인한 형질전환, 오염 가능성 동결보존법 완서동결 (-1°C/분) 액체질소온도보존 (-196 °C) 보호제 : Glycerin, DMSO (15%) 해동 : 30 ~ 37℃안에서 해동시킴 http://www.cellbiocontrol.com