Dept. of Laboratory Medicine Prof. Hee-Joo, Lee Mar, 12, 2012 감염성 질환의 혈청학적진단 Dept. of Laboratory Medicine Prof. Hee-Joo, Lee Mar, 12, 2012

Chapter 70 감염질환의 면역혈청학적 검사

급성기 반응 물질(Acute phase Reactants, APR) 감염, 손상, 수술, 외상, 조직괴사 등 급성 염증 반응시 증가 Alpha-1 antitrypsin, alpha1-acid glycoprotein, haptoglobin, ceruloplasmin, fibrinogen, CRP C-reactive protein(CRP) APR중 가장 빨리 증가하고 치료시 가장 빨리 정상화 APR 중 가장 많이 증가 수술 후 반응의 추적, 잠재감염의 확인, 자가면역질환의 질병활성도 평가 Latex 응집법, 모세관침강법, Nephelometry High sensitive CRP: 심근 질환의 한 지표

프로칼시토닌 새로운 감염증의 표지자 패혈증 등 급성 감염증에서 즉시 상승 임상경과에 따라 곧 감소 패혈증의 조기 진단에 유용

매독의 혈청학적 검사 암시야법 직접면역형광법 비트레포네마 검사(non-treponemal test) 매독에 의해 손상된 지질로 부터 유래된 지질단백성분과 매독균에 대한 cardiolipin에 대한 검사 Venereal disease research laboratory(VDRL) Rapid plasma reagin test(RPR) Unheated serum reagin test(USR) 선별검사 1기, 2기 매독의 진단 정량적 검사: 진단과 치료경과 고역가: 활동성 감염 1:8 미만: 잠재감염, 이전의 치료, 만기매독

혈청전환: 치료 후 6개월이내에 항체 역가가 4배 감소 안되면 치료 실패 위양성: 10-30% 급성위양성: 6개월내 음성 세균 및 바이러스성 감염 폐렴, 아급성 세균성 심내막염,간염, 말라리아, 전염성 단핵구증, 결핵 , 수두, 나병, 예방접종 만성위양성 반응 6개월 이상 장기간 지속 SLE 등 자가면역질환 약물남용, 임신, 노령 Treponema 검사에서 위양성이면 1 개월 간격으로 재검

트레포네마 검사(treponemal test) 매독균 특이항원 검출 매독 트레포네마 형광항체흡착시험(fluorescent tereponemal Ab absorption test, FTA-ABS) 트레포네마감작혈구응집시험(T. pallidum hemagglutination, TPHA), MHA-TP FTA-ABS : 확진검사 만기매독이 의심되는 경우 위양성 : 0.3-2%

혈청 트레포네마 양성이면서 뇌척수애 VDRL양성경우 진단 뇌척수액 백혈구 혹은 단백질이 증가되어 이 경우도 추정 진단 가능 선천성 매독 산모의 혈청이 더 적절 신생아 혈청 : 산모의 역가와 비교하기 위해 제대혈 >모체혈 19S-IgM FTA-ABS 항체검사 또는 효소면역법에 의한 IgM 신경 매독 혈청 트레포네마 양성이면서 뇌척수애 VDRL양성경우 진단 뇌척수액 백혈구 혹은 단백질이 증가되어 이 경우도 추정 진단 가능 T P DNA 중합효소 연쇄 반응

연쇄구균 감염의 혈청학적 검사 국소 및 침입성 형태 연쇄구균감염후증 ASO (항원 : Streptolysin O) 인두염, 농피증, 봉와직염, 단독, 패혈증 연쇄구균감염후증 급성류마치스열, 사구체신염 ASO (항원 : Streptolysin O) Anti-Dnase B (항원 : Deoxyribonuclease B) Anti-NADase (항원 : nicotinamide adenine dinucleotide) AH (항원 : hyalouronidase) Streptozyme 검사(항원 : extracelluar product의 혼합항원)

양성률 ASO test 연쇄구균 감염의 기왕력이 있는경우 : Hemolysis inhibition test 혈청 + streptolysin O – 환자혈청내 ASO가 있으면 용혈이 억제 용혈을 일으키지 않는 혈청의 최대 희석 배수의 역수 Todd unit Latex 응집법 : 반정량검사 Nephelometry 200 IU/mL 이상, 2-4주간의 역가가 2배이상 증가시 의의 급성 류마치스열의 80%, 사구체신염의 95%에서 증가

위달시험(widal test) Salmonella O항원과 H 항원에 반응하는 응집소 검출 Rapid slide test, tube test, microplate test S. typhi O >1:160, H > 1:320, 연속 검사로 titer가 증가하는 경우 (2000년 7월 법정전염병 진단기준 O titer 1: 320 이상) 민감도와 특이도 낮음 교차반응, 초기에 항균제 투여시 역가가 증가하지 않고, 살모넬라성 위장관염에는 효용성이 없음.

기타 감염성 질환의 혈청학적 진단 톡소플라스마증 아메바증 마이코플라스마 폐렴 헬리코박터위염 레지오넬라증 라임병 유행성출혈열에 대한 삼중검사 폐흡충항원 피내검사 진균감염의 혈청학적 진단

기타 감염성 질환의 혈청학적 진단 Toxoplasmosis Amebiasis Toxoplasma gondii Giemsa : trophozoites or cysts 관찰 Indirect immunofluorescence, ELISA, indirect hemagglutination Amebiasis Entameba histolytica 장내 아메바 : 신선한 대변에서 충체 장외 아메바 : 스캔 초음파, 혈청학적 검사 IHA 1: 256 이상시

3. Mycoplasma pneumoniae 배양, species specific nucleic acid probe method, PCR, cold agglutinin1:32, 1:64이상시 양성, 민감도와 특이도 낮음, 혈청내 항체 양성( IgM 양성 또는 IgG가 4배이상 증가) 4. Helicobacter pylori gastritis 조직 Urease 검사, 혈청학적 검사(선별검사), urea breath test 5. Legionellosis Legionella pneumophila, 배양, 직접면역형광법, 항체(1:128이상, 4배이상 증가), L. pneumophila I 항원 검사, nucleic acid probe test 6. Lyme disease, lyme borreliosis Borrelia burgdorferi, 특이항체

7. Triple antibody test 8. 폐, 간흡충 항원 피내반응검사 9. 진균감염의 혈청헉적 진단 Leptospirosis : 배양, 수동혈구응집법 쯔쯔가무시열 : 수동혈구응집법 한국형 출혈열 ; Hantaan virus(Bunyaviridae family Hanta virus genus) 입자응집법 8. 폐, 간흡충 항원 피내반응검사 폐/간흡충에 대한 지연성 과민 반응을 보는것 피부에 항원 주사 구진이 60 mm2 이상시 양성 모두 60 mm2이상이면 양쪽의 감염을 의심하나 큰쪽의 반응을 중시 9. 진균감염의 혈청헉적 진단 Candidiasis Cryptococcosis Aspergillosis

결핵의 피부반응 검사: Tuberculin skin test M. tuberculosis 균주로 부터 정제하여 얻은 시약 결핵이 임상적으로 의심이 되는 경우 시행 감염 후 3주-3개월 후에 투버쿨린 검사상 양성 위양성 : 비정형 결핵균, BCG 접종 받은 경력이 있는 경우 위음성 ; 바이러스성 감염(홍역, 유행성 이하선염, 수두, 인플루엔자 등) 면역억제(약물, 단백영양실조), 노령, 스트레스, 동반질환(sarcoidosis, 악성종양, 림프종), HIV 감염, 생바이러스 백신 접종, 기술적 실수, 시양긔 변성

Virus 임상적 증후군 검체의 채취 및 운송 검사실 진단법 감염초기에 검체를 채취하는 것이 중요 운송배지 :Veal infusion액체배지, sucrose-phosphate-glutamate 배지 검사실 진단법 Cytopathic effect Shell vial법 혈청학적 검사법 분자생물학적 방법

바이러스 세포 배양법 항원검출법 핵산검출법 혈청학적 진단법 전자현미경에 의한 바이러스 입자의 관찰 배양세포에서 바이러스 병변효과가 관찰되면 의심되는 바이러스에 대한 단클론항체 이용하여 면역형광법으로 확인 CMV 항원검출법 효소면역법, 면역형광법 핵산검출법 핵산교잡법 PCR검사법 혈청학적 진단법 IgG, IgM항체 전자현미경에 의한 바이러스 입자의 관찰

CMV의 cytopathic effect RSV cytopathic effect

Shell vial culture

pp65 Ag에 대한 단클론항체를 이용한 면역화학염색 CMV 핵의 early Ag에 대한 단클론 항체로 검출 pp65 Ag에 대한 단클론항체를 이용한 면역화학염색

바이러스 감염의 혈청학적 진단 개요 배양이 까다로운 경우, 배양시 동물 접종이 필요한 경우, 생물학적 위험이 있는 경우 4 배이상의 항체 역가 증가, 음성에서 양성으로 변환 IgM : 현재 감염 2. 선천성 바이러스 감염 : TORCH 검사 CMV : CMV분리, CMV IgM Rubella : Anti-rubella IgM, nested RT PCR HSV : Anti-HSV-IgM, shell vial culture, PCR HIV : ELISA, western blot, HIV-RT PCR monitoring Parvovirus B19 : Anti-parvovirus B19 IgM, PCR Enterovirus

Typical Serological Profile After Acute Infection Note that during reinfection, IgM may be absent or present at a low level transiently

바이러스성 간염 Hepatitis A HEV : Anti-HEV, PCR HBV HCV HDV Anti-HAV IgM, HAV항원 : 대변, PCR HEV : Anti-HEV, PCR HBV HCV HDV Epstein-Barr바이러스에 의한 전염성 단핵구증

Hepatitis A Virus Hepatovirus 분변 입으로 대부분 영유아기에 감기처럼 가볍게 10세 이후의 성인의 대부분은 항체 This is an electron micrograph of HAV that causes hepatitis A. See the next slide for specifics about this virus.

Hepatitis B Virus Haepadnaviridae DNA virus 일부만 double stranded HBs Ag 보균율 : 6% 혈액수혈, 주사 바늘에 찔려 6개월 이상시 만성 보균자 성인에서 감염되는 경우 10% 소아인 경우 25% 수직전파 90% 백신에 의해 예방 가능 YMDD mutants: 라미부딘 투여 후 6개월 부터 나타낼 수 있으며 투여기간에 비례하여 증가, 28

Serologic Pattern of Acute HCV Infection with Recovery anti-HCV Symptoms +/- HCV RNA Titer ALT Normal 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 Months Years Time after Exposure

후천성 면역결핍증의 검사

항체검사법 스크리닝검사법 확진검사법 가정용 검사용 키트 소변 및 타액 검사 효소면역측정법 신속검사 웨스턴 블롯 IFA Rapid immunoprecipitation assay Line immunoassay 가정용 검사용 키트 소변 및 타액 검사

항원 검출법: p24 Ag 혼합법 HIV감염환자의 면역학적 검사 T세포 아형(CD3, CD4, CD8) 단핵구 표지자, 자연살세포표지자 B세포표지자, HLA-DR, CD38, Ki67, CD25, CD45RO (naïve), CD45RA (memory), CD62L, CD27

HIV감염 환자의 혈중 바이러스 정량검사와 약제 내성검사 HIV RNA assay Resistance testing

Western Blot HIV-1 Western Blot Lane1: Positive Control Lane 2: Negative Control Sample A: Negative Sample B: Indeterminate Sample C: Positive