사카자키 및 바실러스균 검사법 국립수의과학검역원 축산물규격과 김영조

Ent. Sakazakii 개요 균 명명 배경 - 노란색 색소를 형성하는 Enterobacter cloacae(yellow-pigmented Ent. cloacae) - Steigerwalt et al.는 Ent. sakazakii가 Etn. cloacae와 유전적으로 다름을 보고(1976) - 새로운 종으로 분류(1980) ※ 일본학자 Riichi sakazakii의 이름을 따서 명명

Ent. Sakazakii 개요 균 특성 - Gram 음성 - 간균 - 편모를 갖음 (motile)

Ent. Sakazakii 개요 균 특성 - Oxidase 음성 - D-sorbitol 음성 - α-glucosidase 양성(93.0%) - 물, 토양, 동물 장관 등에 정상적으로 존재 ※ 분리빈도는 높지 않음

Ent. Sakazakii 개요 관심배경 최초 발생보고 (1929) 영국 St. Albans 발생(1958) 후 주목 1961 ∼ 2002 : 48건 발생보고 · 사망 : 15명, 회복 : 31명, 불명 : 2명 ※ 리콜 · 2002 : 1.5million cans(Wyeth Nutrition) · 2004 : 100million cans(Pregestimil INF)

Ent. Sakazakii 개요 관심배경 CODEX에서 논의 제안(미국, 2003) - 카나다에서 초안 마련하여 Step 4에서 논의 함 FAO/WHO 합동보고서 : 위해도 언급(2004) 2004년에도 지속적인 발생 - 프랑스 : 9명감염(2명 사망) - 뉴질랜드 : 5명감염(1명사망) ※ 치사율이 20∼50%

Ent. Sakazakii 개요 관심배경 조제분유는 멸균제품이 아님 - 오염에 의한 검출가능성이 높음 : 141시료에서 20시료 검출(14%) ※ 환경에서 검출 예 Place 갯수 검출 공장 9 8 집 16 5

Ent. Sakazakii 개요 미생물위해도 확인에 따른 분류 Category A : 질병발생과 인과관계 분명 - 살모넬라, Enterobacter sakazakii Category B : 질병발생과 인과관계 증명되지 않음 - Enterobacter sakazakii외의 Enterobacteriaceae : Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae Category C : 인과관계가 Category B보다 낮음 - Clostridium perfringens, Cl. botulinum, Listeria monocytogenes, Bacillus cereus

Ent. Sakazakii 개요 조제분유 생산 공정 Wet mix process : 모든 성분을 액상으로 하여 혼합하고 살균처리 한 후 분말화하는 과정으로 생산 Dry mix process : 각각의 성분을 분말화한 후 혼합하는 과정으로 생산 Combined process : Wet mix process 과정으로 생산한 base에 Dry mix process로 생산한 일부 성분을

Ent. Sakazakii 개요 열처리에 대한 오염원인 열에 대한 높은 내성이 높은 오염의 원인(과거) - 70℃로 조유할 경우 균수가 104배의 감소 ※ 균 종에 따라 열내성이 20배정도의 차이를 나타냄 삼투압에 대한 내성(현재) : - 환경에서 생존율을 높임으로써 재오염의 가능성을 높임

Ent. Sakazakii 개요 병인 기회감염의 원인 WHO/FAO 합동 워크샵(2004) - 내성균이 많이 출현함으로 사람에게서 기회감염 ※ 정상상태에서는 비병원성이나, 어떤 특정한 환경에서 병원성이 됨 WHO/FAO 합동 워크샵(2004) - 1살 미만의 영아가 위험군임 - 특히, 면역결핍아, 2.5kg미만의 저체중아, 미숙아 등이 위험군임 ※ 모든 사람에게 질병을 유발할 수 있음

Ent. Sakazakii 개요 감염 영·유아의 증상 패혈증(Septicemia) 뇌막염(Meningitis) - 혈액에서 세균의 증식 뇌막염(Meningitis) - 뇌막에서 염증 괴사성장염(Necrotizing enterocolitis) - 장 괴사를 이끄는 급성염증반응

Ent. Sakazakii 개요 Ent. sakazakii 기준 ※ 2007. 01. 09일부터 시행함 불검출이어야 함 - 조제분유 및 기타조제분유에 한함 - 시료량을 100g으로 하여 검사실시 ※ 2007. 01. 09일부터 시행함

Ent. sakazakii 에 대한 국제기준 국가 기준 검사방법 비 고 EU 0/10g ISO/TS ’06.1.1부터 시행 국가 기준 검사방법 비 고 EU 0/10g ISO/TS ’06.1.1부터 시행 (n=30) 22964 CODEX 없음 - 제정논의중 0/10g(n=30) 미국 없음 FDA방법 MPN이용 카나다 없음 BAX sys PCR이용 호주 없음 FDA방법변형 뉴질랜드

Ent. sakazakii의 생화학적 성상(FDA) 생화학적 시험 E. E. E. sakazakii cloacae aerogenes Lysine decarboxylase - - + Arginine dihydrolase + + - Ornithine decarboxylase + + + KCN, growth in + + + sucrose + + + dulcitol - (-) - adonitol - (-) + raffinose + + + D-sorbitol - + + X-methyl-D-glucoside + (+) - D-arabitol - (-) +

Chromogenic Enterobacter sakazakii agar 도말 Ent. Sakazakii 검사방법 시료준비 및 전배양 (시료 100g을 900ml DW 접종) 배양액 10ml을 90ml EE Broth에 접종 E. sakazakii medium 및 Chromogenic Enterobacter sakazakii agar 도말 TSA 도말 (yellow pigment 집락) 생화학적 성상시험 36℃에서 18간 배양 36℃에서 18시간 배양 36℃에서 24±2시간 배양

B.cereus 개요 균의 특성 The family Bacillaceae Gram-positive, 간균 운동성 (motile) 있음 아포형성 →100℃/40분 생존

B.cereus 개요 적정온도: 30 - 40℃ pH range: 5.0-8.8(Opt. pH 6.0-7.0) Min. Aw: 0.93 편재성 ( Widespread in nature) 호기적 또는 혐기적 조건

B.cereus 개요 증상: 설사형과 구토형(12~24h 지속) 감염량: 106 cfu/g 독신생성(heat stable/heat liable toxin) 특별한 치료방법 없음 사람과 사람의 감염은 없음

B.cereus 개요 감염원 일반환경 (흙, 공기, 물 등) 동 물 식품 (해산물, 샐러드. 분유 등) raw, dried or processed food 일반환경 (흙, 공기, 물 등) 동 물 식품 (해산물, 샐러드. 분유 등)

B.cereus 개요 오염방지 요리하는 동안 충분한 온도로 가열 요리된 뜨거운 음식은 60℃이상유지 음식의 저장은 4℃이하 요리된 식품과 날것의 교차오염 방지 과일, 채소를 깨끗한 물에 잘 씻음 조리자의 개인위생준수

B.cereus 개요 B.cereus 기준 G당 100 이하(멸균제품은 음성) 조제유류 (조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유·우유, 기타조제분유 ·우유,) 시료량은 25g으로하여 실시함 2007.10. 5. 기준 고시됨

조제분유에서 B.Cereus의 국제기준 CODEX: 기준 없음 EU: 기준 없음 (일반세균, 대장균군, 살모넬라 기준 있음) EU: 기준 없음 (E.sakazakii, Salmonella.spp 검사) 카나다: n=10, c=1, m=102, M=103 미국(FDA): < 100/g 호주/뉴질랜드: n=5, c=1, m=102, M=103 일본: 기준 없음(100 이하로 자체규제)

조제분유에서 B.Cereus의 국제기준 E U 100 cfu/ g Absent in 0.01g Netherlands Portugal Hungary Poland Switzerland E U 100 cfu/ g Iran Denmark Absent in 0.01g For Powdered Infant Formula Products: B. cereus; n=5, c=2, m=10, M=100

B.cereus와 유사균의 생화학적 특징 Catalase + + + motility + + - 생화학적 시험 B.cereus B.thuringiensis B.mycoides Catalase + + + motility + + - Reduction nitrate + + + Tyrosine 분해 + + + Egg yolk reaction + + + Glucose 이용능 + + + VP reaction + + + Heamolysis + + + Toxin enterotoxine enterotoxin - 결정체

B.Cereus 정성 검사법 시료준비 (시료 25g을 225ml BPD 접종) 균질화한 검액 MYP한천배지에 접종 생화학적 성상시험 30℃에서 24시간 배양

B.cereus 정량 검사법 시료준비 (시료 25g을 225ml BPD 접종) 균질화한 검액을 10-2~10-6단계희석 MYP에 희석용액 0.2ml씩 5장 도말 30℃에서 24시간 배양 5개 이상의 의심집락을 선별하여 생화학적 성상시험

대 책 생산자 대책 소비자대책(개인위생) 공정에 따른 철저한 위해분석 필요 오염경로 파악 위생관리 철저 Hang time 줄임 - 조유 후 곧바로 수유하고 남은 것은 버림 젖병 및 기기 살균 철저 - 젖병 표면등에 biofilm 형성을 잘 함 70℃ 물로 조유

Thank You !