3M 페트리필름 이란 ? 식품 및 환경에 존재하는 각종 미생물 (일반세균, 장내세균, 대장균 및 대장균군, 진균, 황색포도상구균 등)을 검사하기 위한 건조필름배지(Dry rehydratable film media)는 얇은 필름에 영양성분, 수용성 겔 및 균 indicator(TTC 등)을 3M社의 특수한 기술로 코팅하여 미생물이 수용성겔 안에서 증식하게 함. 시료 1mL를 페트리필름에 접종, 배양시키면 각 미생물의 특성에 따른 지시약의 색 변화로 균수를 판단

전통적인 미생물 실험과 비교 ♣ 배지의 보관 기간 및 제조 시 시간비용 효과 ♣ 배지 제조자 숙련도에 따라 품질 변화 고려 초자준비 배지제조 (1시간~) 배지 멸균 (2시간) 한천배지 접종 배양 페트리필름 준비 한천배지 접종 배양 ♣ 배지의 보관 기간 및 제조 시 시간비용 효과 ♣ 배지 제조자 숙련도에 따라 품질 변화 고려 ♣ 멸균기, 실험 장비 및 도구 준비, 설거지 등 노동비, 에너지비 ♣ 실험량이 늘어나는 경우 매번 배지 제조의 번거로움 ♣ 배지 준비 보다 가치있는 일 중심으로 업무 변화 • HACCP 준비 및 수행 • 작업자 교육 • 현장 검사

3M 페트리필름의 구성 폴리프로필렌 커버 접착제+지시약 수용성 겔 영양성분 접착제 풀리에틸렌 커버

일반세균용 페트리필름 배지 조성 및 그 기능 Pancreatic digest of casein Yeast Extract Sodium Pyruvate Dextrose Potassium Phosphate, Dibasic Potassium Phosphate, Monobasic Guar Gum 2,3,5-TriphenylTetrazolium Chloride 성장에 필요한 아미노산과 질소원 성장 자극제인 B-complex 비타민 제공 생리기능 강화 에너지원 버퍼 작용 Water soluble gelling agent 붉은 색 염색 dye

2. 3M 페트리필름을 이용한 실험법 1. 시료채취 (A) (B) (C) (D) (E) (F) : 멸균글러브를 착용한다. : 샘플 수거백에 레이블을 해 놓은 후 : 미리 저울에 달아 영점을 잡는다. : 멸균도마에 식품 샘플을 놓고 일회용 칼과 핀셋을 이용하여 검사 대상을 자른다. (E) : 준비한 멸균백에 넣는다. (F) : 시료의 무게를 잰다. ( 약 10~25 g을 취한다.) (E) (F)

2. 3M 페트리필름을 이용한 실험법 2. 시료 전처리 및 희석 (A) (B) (C) (D) (E) : 시료무게의 약 10배(90 ㎖) 해당하는 멸균 생리식염수를 넣는다 (10배). : 멸균백의 와이어를 이용해 두 번 접고 전처리 stomacher를 이용해 균질 화한다. (C) : 멸균백 스탠드에 옮긴 후 입구를 벌려 멸균 일회용 스포이드를 이용해 1 ㎖를 취한다. (D) : 멸균희석액(9 ㎖)에 1 ㎖을 옮긴다(100배). (E) : 진탕 혼합하여 희석한다. (vortex mixer이용) (E)

2. 3M 페트리필름을 이용한 실험법 3. 접종 및 배양 (A) (B) (C) (D) : 페트리필름에 레이블을 한다. : 페트리필름에 레이블을 한다. : 멸균희석액에서 1 ㎖를 멸균 스포이드를 이용하여 페트리필름 에 접종한다. (e•swab의 경우 1 ㎖을 바로 떨어뜨린다) : 배양기 (35 ℃)에 배양한 후 : 배양된 결과를 판독한다.

3. 3M 일반세균용 페트리필름 계수: 0 계수: 143 계수: TNTC ▶ 25~250 cfu ▶ 시료에 고추가루같은 빨간 색 이 있을 경우는 멸균필터백 이용 ▶ 순수분리배양 유산균 배양 가능

3. 3M 일반세균용 페트리필름 ▶ 일반세균용 페트리필름(AC) 사용시 수화현상이 일어날 때 ♣ 수화현상의 원인 : 일부 미생물 중 페트리필름에 포함된 Guar gum을 분해하여 gel 이 액상으로 바뀌게 됩니다. Guar gum ♣ 조치 방법 ① 기존 희석배수에 10배정도를 더 희석합니다. ② 수화현상이 일어나기 전에 콜로니를 계수합니다. ③ 페트리필름을 20장 이내로 쌓아서 배양합니다. (5~10장 추천) ④ 낮은 온도에서 배양합니다. (30~32℃) ⑤ 일반세균용 누름판(20㎠)보다 넓은 효모곰팡이용 누름판(30㎠) 으로 눌러서 넓게 펴 줍니다. ♧ 주로 나타나는 식품 샘플은 전분, 쵸코렛, 야채류 등에서 잘 나타남

3. 3M 대장균/군용 페트리필름 배지 : Violet Red Bile nutrients + β-glucuronidase indicator+ TTC 가스포집 푸른색 colony, 15~150 cfu 전통적 방법 : MPN(most probable number) Method 한번 접종으로 확정실험 총 실험시간 24~48 hr E.Coli Coliform Coliform E. coli count = 17 Estimated total coliform count = 150 E. coli = 49 (blue colonies with gas) Total coliform = 87 (red and blue colonies with gas)

3. 3M 대장균/군용 페트리필름 ◈ 대장균/군의 기포발생 패턴 대장균군이란? : Gram 음성, 무아포성 간균으로 유당을 분해하고 가스를 발생하는 모든 호기성, 통성혐기성 세균을 말한다.

3. 3M 장내세균용 페트리필름 붉은색 균체 + 가스/ 붉은색 균체+노란색 산 지역/ 붉은색 균체+가스방울+노란색 산지역 Official MethodsSM number 2003.01 by AOAC INTERNATIONAL 3. 3M 장내세균용 페트리필름 붉은색 균체 + 가스/ 붉은색 균체+노란색 산 지역/ 붉은색 균체+가스방울+노란색 산지역 한번 접종으로 확정실험 총배양시간 : 24 hr 붉은색 균체 + 가스+노란색 산 지역 붉은색 균체 + 가스 붉은색 균체 + 노란색 산 지역 배지 배양조건 측정 비고 VRBG 24시간 Black red colony SMEDP BGGB(MPN) 48시간 Gas ISO7402 Petrifilm(modified VRBG) Red, 산생성, Gas 확정실험

4. 페트리필름을 이용한 환경검사 표면검사 1. 샘플링킷트 준비(표시) 2. 샘플링킷트 개봉 3. 표면샘플링방법 4. 페트리필름을 이용한 환경검사 표면검사 1. 샘플링킷트 준비(표시) 2. 샘플링킷트 개봉 3. 표면샘플링방법 4. 손 검사 준비 5. 칼, 도마 검사준비(보관중) 6. 행주 검사준비(보관중) 7. 검사 킷트 준비 (표시) 8. 접종 후 누름판으로 누름. 9. 35℃에서 24시간 배양

4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 cfu/60분/petrifilm(60 ㎠) 4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 페트리필름 전처리 : 사용하기 최소 1시간 전에 멸균액 1 ㎖을 미리 분주하고 필름덮개를 덮어 둔다. 2. 페트리필름 위치 : 벽에서 30 ㎝ 떨어진 곳, 바닥에서 30 ㎝ 떨어진 곳 3. 15분간 노출 4. 배양 : 일반세균 (35 ℃, 24시간), 효모곰팡이(25 ℃, 3~5일) 5. 계산 : 일반세균 (colony 수/40 ㎠), 효모곰팡이 (colony 수/60 ㎠) cfu/60분/petrifilm(60 ㎠) 87mm petridish 면적: 59.4 ㎠

4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 관리 예 - 오염작업구역 : 낙하세균수(생균수) 100개 이하 4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 관리 예 - 오염작업구역 : 낙하세균수(생균수) 100개 이하 - 청결작업구역 : 낙하세균수(생균수) 30개 이하, 낙하진균수(곰팡이, 효모의 생균수) 10개 이하 ♣ KGMP와 NASA의 청정도와 공중균 (예) 청정도 등급(한국) Class(NASA) 관리기준 1A 100 낙하균: 1개/hr/9㎝Φ이내 1B 10,000 낙하균: 5개/hr/9㎝Φ이내 부유균: 20개/㎥ 이내 2 100,000 낙하균: 20개/hr/9㎝Φ이내 3 없음 기준 없음, 청결유지

5. 기타 건조필름배지 보관 건조필름배지 폐기 - 페트리필름은 감염성폐기물중 병리계폐기물로 분류된다. 5. 기타 건조필름배지 보관 페트리필름 보관 방법 개봉 전 : 냉장실 보관 (4~8 ℃) 개봉 후 : 일반 테이프나 집게로 봉인보관 (실온, 보존기간 1개월) 건조필름배지 폐기 - 페트리필름은 감염성폐기물중 병리계폐기물로 분류된다. (단 감염성폐기물 발생기관에 한함) - 감염성폐기물 발생기관: 병원, 보건소, 장례식장, 동물병원 등 기타 기관(식품회사 등)은 사업장 일반폐기물로 관리하며 바이오 헤저드백에 넣고 멸균 후 폐기하면 됩니다.