Macromolecule analysis Ⅱ-① Lipid Extraction from tissues
Mouse tissues에서 Lipid 추출 실험 목적 Mouse tissues에서 Lipid 추출 지질은 환경적, 유전적 질병을 진단할 수 있는 지표로 이용된다. mouse liver에서 지질을 추출하여 TLC(thin-layer chromatography)를 통해 여러 지질의 함유량을 확인한다.
Introduction 생체성분 중에서 물에는 불용성이고 유기용매에는 가용성인 물질을 총칭해서 지질이라고 한다. 지질은 일반적으로 단순지질, 복합지질, 유도지질로 분류된다. 지방조직 이외의 조직, 장기의 지질은 복합지질의 비율이 높고, 이것을 조직지방이라고 한다.
Introduction Cholesterol TC(Total Cholesterol)는 우리 몸에 꼭 필요한 물질로, 세포의 세포막을 구성하고 있고 주요 대사에 관여하고 있다. Cholesterol은 음식으로도 섭취되지만 체내에서 합성할 수 있다. 이처럼 TC는 우리 몸에 꼭 필요한 성분이지만 혈중의 높은 TC level은 고혈압, 동맹경화, 뇌졸증, 심근경색 등과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
Materials & Methods Homogenizer, PBS, glass tube, chloroform, Triton-X100, waterbath, Centrifuge, pipette, tip, DW, MeOH, Vortex, Nitrogen gas ▶ Sample preparation 1. Place approximately 50~100mg tissue in 500ul PBS and homogenize. 2. Add 2ml of chloroform : methanol (2:1) 3. Vortex and spin at 3000rpm for 10min 4. Transfer the organic phase (bottom) to a glass tube 5. Add more 1ml of chloroform : methanol mixture in sample vial 6. Vortex and spin at 3000rpm for 10min 7. Separate the bottom layer to glass tube 8. Dry under Nitrogen
Materials & Methods Homogenizer, PBS, glass tube, chloroform, Triton-X100, waterbath, Centrifuge, pipette, tip, DW, MeOH, Vortex, Nitrogen gas ▶ Sample preparation 9. Solubilize the dried lipid in 250ul chloroform containing 1% Triton – X 100, 10. Dry the chloroform in Nitrogen 11. Solubilize the dry contents in 200ul DW 12. Vortex and sonication for 5min 13. Labeling and storage in 4°C
Results
Discussion