WHO표준물질을 이용한 Insulin 정밀도 및 정확도평가 서울의과학연구소 염지혜

contents 배경(Background) 방법(Method) 결과(Results) 고찰(Conclusion) Radio Immuno Assay

Insulin 정밀도 및 정확도 분석 배 경 1. (Background) 표준물질을 기반으로 검사방법간, 장비간의 차이를 최소화하여 검사결과의 신뢰도,정확도를 높이는 검사의 표준화가 현재 임상검사 분야에서 많이 요구가 되고 있다. 본원에서는 현재 시행하고 있는 Insulin(IRMA) 검사의 정밀도(Precision)와 정확도(Accuracy)를 분석 평가하기 위해 WHO 표준 물질을 사용하여 보다 정확한 insulin 농도 측정을 분석을 하여 신뢰도를 높이기 위한 validation test를 시행하였다. Radio Immuno Assay

배 경 2. (Background) Radio Immuno Assay

표준화 관여 기구 배 경 3. (Background) ISO (Internal Organization for standardization)       :the world's largest developer and publisher of International Standards WHO (World Health Organization)       :표준화물질의 필요성 제기 NIST (National Institute of Standards and Measurements)       :물질선택,공동연구,생물학적 활성도 결정 위한 단위 결정 IRMM (Institute for Reference Materials and Measurements)      : 물질선택,공동연구,생물학적 활성도 결정 위한 단위 결정 NIBSC (National Institute for Biological Standard and Control)      :표준물질로서 신뢰성과 안정성을 검증 연구,표준물질 보관 및 배포 ECBS (Expert Committee on Biological Standards)       : Registration IRP Radio Immuno Assay

International Reference Preparation (IRP) 정립 배 경 2. (Background) International Reference Preparation (IRP) 정립 the development of new standards in response to sectors and stakeholders that express a clearly established need for them Issue standards Regulatory and research communities as inter-national Standards reference materials Product Advice standards Development and provision of key biological standards and reference materials Radio Immuno Assay

International Reference Preparation by NIBSC 배 경 2. (Background) International Reference Preparation by NIBSC National Institute for Biological Standards and Control(NIBSC) is a non-departmental public body (NDPB) of the UK government, established, in 1975. The system of World Health Organization (WHO) International Standards & controls provides a set of common standards& control that are essential if quality testing results from different parts of the world are to be comparable currently the world's major producer and distributor of WHO International Standards and reference materials Radio Immuno Assay

WHO Reference Reagent Insulin, Human 방법 1. (Method) WHO Reference Reagent Insulin, Human WHO Reference Reagent Insulin, Human For Immunoassay Product number 66/304 (WHO, 1975) Type of standard WHO International Standard or Reference Reagent suitable to serve as standard for Immunoassays (WHO/BS/74.1084) ) ampoule contains 3 INTERNATIONAL UNITS, (by definition). Radio Immuno Assay

WHO Reference Reagent Insulin, Human 방법 1. (Method) WHO Reference Reagent Insulin, Human Human insulin approx 130 micrograms Sucrose approx 5 mg as the dry residue after freeze-drying from 1ml 0.00745M acetic acid initial solution 0.75ml of 0.07M veronal buffer (pH 8.6) Subsequent dilutions should be made with buffer containing carrier protein Radio Immuno Assay

Test kit 방법 1. (Method) Biosource INS – IRMA Kit Biosource, Europe S.A 표준물질 농도별 검액: kit 내 희석용액으로 설정되어있는 zero std. (0uIU ,human protein 성분)를 사용 AMR : 1∼365 uIU LOD : 1 uIU Radio Immuno Assay

정밀도 (Precision)- 분석 방 법 2. (Method) CV(%)산출 5일 x 12회 1.5 만분의 1 200uIU 10만분의 1 30uIU 5일 x 12회 200 만분의 1 Who insulin 3IU CV(%)산출 2 만분의 1 1.5 uIU 150uIU Radio Immuno Assay

정확도 (Accuracy)- 분석 방 법 2. (Method) Recovery(%) 산출 5일 x 12회 expected Con. 205.8 uIU expected Con. 15.9 uIU 2000 uIU 100 uIU Each Insulin : Low pooled serum(6.5uIU) = 1:9 5일 x 12회 Recovery(%) 산출 1000uIU 10 uIU expected Con. 6.0 uIU expected Con. 105.9 uIU Radio Immuno Assay

결과1. (Results) 검사 측정 분포도 Radio Immuno Assay

결과1. (Results) 정밀도 분석 WHO 200 uIU WHO 150uIU 30 uIU WHO 1.5uIU 정밀도(Precision)-일내,일간 변동 (Intra-Inter assay) 분석 CV(%)산출 WHO 200 uIU WHO 150uIU 30 uIU WHO 1.5uIU 1일 (x12 CV%) 188.8 (1.7) 146.4 (4.1) 31.2 (2.6) 2.9 (10.8) 2일(x12 CV%)) 196.8 (4.2) 142.3 (7.4) 30.6 (5.7) 3.2 (10.7) 3일(x12 CV%)) 203.1 (9.3) 158.5 (4.2) 27.8 (7.6) 1.4 (9.2) 4일(x12 CV%)) 206.1 (6.0) 158.9 (6.6) 27.9 (2.5) 2.8 (10.8) 5일(x12 CV%)) 211.8 (5.6) 158.5 (5.6) 28.9 (7.9) 2.3 (9.5) Mean 201.3 152.9 29.3 2.5 SD 5.7 2.1 0.7 0.2 CV(%) 2.8 1.4 9.1 WHO insulin 농도 검사차수 Radio Immuno Assay

결과2. (Results) 정확도 측정 분포도 Radio Immuno Assay

정확도(Accuracy)- WHO insulin 물질+ Low Pool serum 혼합 Recovery(%)산출 결과2. (Results) 정확도 분석 정확도(Accuracy)- WHO insulin 물질+ Low Pool serum 혼합 Recovery(%)산출 205.8 (2000uIU+Pooled Serum) 105.9 (1000uIU+P.S) 15.9 (100uIU+P.S) 6.0 (10uIU+P.S) 1일 (x12 평균) 218.9 108.4 15.3 8.0 2일(x12 평균) 213.5 112.8 16.2 6.2 3일(x12 평균) 226.9 120.1 14.7 6.3 4일(x12 평균) 232.6 101.5 15.1 6.5 5일(x12 평균) 216.1 118.2 16.1 5.3 Mean 221.6 15.6 Recovery (%) 107.7 106.6 98.2 108.5 Insulin expected Con.(uIU) 검사차수 Radio Immuno Assay

고 찰 1.(Conclusion) 현재 검사실에서 검사의 정도관리를 위해 외,내부정도관리 등을 실시하고 있다. 이와 함께 정밀도 및 정확도를 증명하기 위해서는 보다 표준화된 농도 측정 검증이 필요하다. WHO 표준 물질을 사용, Insulin(IRMA) 검사의 보다 표준화된 농도 측정을 분석 평가하여 검사측정값의 정밀도와 정확도를 검증할 수 있다. 향후 현재 검사 시행되고 있는 다른 검사들도 WHO 표준물질로 표준화된 농도 측정을 보편화하여 검사실내 검증 자료로 확보함으로써 검사실내 측정값의 신뢰도를 높일 수 있다고 사료된다. Radio Immuno Assay

정밀도(Precision) & 정확도(Accuracy) 고 찰 2. (Conclusion) 측정시약의 검증 및 정도관리, 검사 신뢰도 상승 정밀도(Precision) & 정확도(Accuracy) 검증 확보 WHO 표준물질 사용, validation test Radio Immuno Assay