연세대학교 의과대학 임상병리과학교실 최경환, 류종하, 민진홍, 박혜련, 김현옥 냉동해동적혈구의 제조 및 평가 연세대학교 의과대학 임상병리과학교실 최경환, 류종하, 민진홍, 박혜련, 김현옥
냉동적혈구의 장점 역사 적혈구의 장기보관 및 희귀혈액형의 보존 국내 1950년 Smith 등 - 첫 시도 국외 1950년 Smith 등 - 첫 시도 냉동 해동 적혈구 사용은 미국 total RBC transfusion unit의 약 1.5%(0-10%) 임 혈액의 장기보관을 위해 미군 해군병원을 중심으로 연구 진행 국내 1978년 강 등 – 혈액냉동 시도 (적십자사) 1991년 한 등 - 제조 및 평가 1992년 한 등 – 인체수혈(20mL) 1995년 임 등 - 제조 및 평가 1996년 임 등 – 동물수혈실험 1997년 임 등 – 인체수혈(골수공여자)
Methods of RBC Cryopreservation Consideration High-concentration Glycerol Low-concentration Final glycerol concentration(wt/vol) 40% 20% Freezing temperature -65C -120 C Type of freezer Mechanical Liquid nitrogen Shipping Dry ice Deglycerolyzing equipment required Yes No WBC removal (%) 94-99 95
Materials & Methods 대상 방법 High-concentration glycerol method Fresh packed RBCs for in vitro evaluation : 10 unit Autologous RBC for transfusion : 4 unit 방법 High-concentration glycerol method
Freezing
Warming
Transfer RBCs to 1000mL bag
Mix RBCs withglycerolyte sol. Glycerolyte 57 solution Mix RBCs withglycerolyte sol.
Balancing
Transfer the supernatant from 1000mL bag to packed RBC bag after centrifugation
The color of the supernatant
After transfer of the supernatant
Remove the packed RBC bag
Glycerolized RBC in canister Transfer the glycerolyzed RBC from 1000mL bag to 600mL bag Glycerolized RBC in canister
Thawing
Automatic Cell Washer Control Panel COBE 2991
Option for washing the thawed RBC
Add washing solution to the RBC bag 12 % NaCl processing solution
Transfer the mixed RBC with washing sol. to the centrifugal bag
Processing
0.2% dextrose and 0.9% NaCl processing solution Last washing 0.2% dextrose and 0.9% NaCl processing solution
The thawed-washed RBC
Results Parameters Mean ± SD Range Recovery rate (>80%) 72.9 ± 8.2 61.4-88.9 S.G. (<1.3384) 1.006 ± 0.001 1.005 – 1.011 K+ (<1.5 mEq/L) 1.17 ± 0.42 0.8-2.0 Hb ATP (3.5 ± 0.9umol/g) 3.5 ± 0.9 Hb 2,3-DPG (12.5±5.3umol/g) 12.5 ± 5.3 Simulated transfusion (<30mg/dL) 2.65 ± 1.18 1.1-4.6 Blood culture No grwoth
Autologous infusion 4 normal healthy donor Hct 43.0%, Vol : 220 (135-300) mL After transfusion no Hemoglobinuria Serum-haptoglobin 96.0±40.8 mg/dL no adverse sign or symptom
결론 냉동 해동 적혈구 제조과정에서의 방법 표준화 냉동 : - blood와 glycerol의 농도비 냉동 해동 적혈구 제조과정에서의 방법 표준화 냉동 : - blood와 glycerol의 농도비 - glycerol의 주입속도 해동 : - 고장액으로부터 등장액까지의 washing solution의 선택 - automatic cell washer의 사용 회수된 적혈구의 기능은 정상범위였으며 모의수혈의 결과와 실제 자가 수혈시 수혈부작용은 관찰되지 않음 국내의 기술 축적으로 냉동해동 적혈구의 상용화는 가능해 졌으며 현재 건강보험수가 산정작업 중