고병원성 조류인플루엔자(HPAI) 검사과정 1. 특정병원체부재(SPF) 부화란(10일령)에 시료 접종 ① 검사시료를 원심분리 ② 0.45㎛ filter로 여과 ③ 시료당 5개의 부화란에 0.2㎖ 씩 접종 혈구응집반응검사(HA Test) 10% 정상 닭 적혈구와 부화란 뇨막액을 반응하여 혈구응집여부 확인 2. 혈구응집능 바이러스 확인 3. 조류인플루엔자바이러스 혈청형 검사(H5N1) H 혈청형 검사 ☞ 15종의 H항원 혈청형에 대한 혈구응집 억제반응 시험결과 H5형으로 판정 H5N3 H5N1 H5N2 H5N9 H6N8 H6N2 H7N1 H7N7
4. 분리 바이러스의 병원성 확인 N 혈청형 검사 유전자 검사법으로 H5형 확인 H항원 분절부위 아미노산 서열 분석 ☞ 9종의 N항원에 대한 항혈청과의 Neuraminidase 억제반응 시험결과 N1형 으로 판정 290 bp 유전자 검사법으로 H5형 확인 ☞ 분리 바이러스의 H 유전자가 H5형 임을 확인 4. 분리 바이러스의 병원성 확인 H항원 분절부위 아미노산 서열 분석 ☞ H5항원 분절부위 아미노산서열분석 결과 고병원성 인플루엔자 특징의 아미노산 배열을 가지고 있음. 바 이 러 스 HA1 HA2 국내발생 고병원성주 K-R- -K-K-R G-L-F-G-A 중국산 가금육 분리주 R-R-R-K-K-R 국내발생 비병원성주 P-A-A-S-Y-R A(Alanine), S(Serine), Y(Tyrosine), R(Arginine), G(Glycine), L(Leucine), F(Phenylalanine), T(Threonine) Basic Amino Acid : K(Lysine), R(Arginine), H(Histidine) 닭 섬유아세포에서의 세포변성효과(CPE) 확인 ☞ 세포배양 배지 내에 Trypsin 등의 단백질 분해효소 첨가 없이 바이러스 접종시 세포변성효과 확인 < 바이러스 미접종 세포> < 분리 바이러스 접종 세포>