Catalase test Hemolysis pattern Bacitracin susceptibility test 임상미생물학Ⅰ 실습 2주차 Catalase test Hemolysis pattern Bacitracin susceptibility test

+ - + - CATALASE TEST CATALASE TEST O-F TEST HEMOLYSIS PATTERN COAGULASE TEST M. luteus α β γ + - OPTOCHIN TEST BACITRACIN TEST BACITRACIN TEST S. aureus S. epidermis S. mutans S R S R MSA S. pneumoniae S. pyogenes DNase S. viridans Group L Strepto.

오늘 사용할 균주 1. Staphylococcus aureus 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 오늘 사용할 균주 1. Staphylococcus aureus catalase + / coagulase + / MSA에서 노란 집락 / DNase + / O-F test F / BAP 상에서 β-hemolysis pattern β-hemolysis pattern 40~50%의 건강인 비강에서 분리됨 피부 감염 : 모낭염, 부스럼, 옹종, 봉소염, 농가진, 수술 환부 감염, 등 피부 외 감염 : 균혈증, 심내막염, 수막염, 폐렴, 화농성 관절염, 골수염, 식중독 중요한 원내감염균 : MRSA (Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus) S. aureus는 비선택배지에서 주로 흰색 colony를 형성하며, 장기간 배양시 연한 노란 빛을 띄기도 한다. (S. aureus가 색소인 carotenoid를 생성하기 때문) - 10% 식염 농도에서도 증식 가능하다.

2. Streptococcus viridans 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 2. Streptococcus viridans catalase - / α-hemolysis pattern / optochin resistance “viridans”의 어원이 “녹색”을 의미하며, Streptococcus viridans는 α-hemolysis pattern를 나타내는 streptococci( 사슬알균) 이라는 의미. 실제, blood agar plate에서 배양시 집락이 암녹색으로 변한다. 건강인의 oral cavity, female genital tract, 등에서 발견되는 normal flora 간혹 균혈증을 일으키면서 subacute endocarditis (아급성 심내막염)을 일으키기도 한다.

3. Streptococcus pyogenes 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 3. Streptococcus pyogenes catalase - / β-hemolysis pattern / bacitracin sensitivity colony 크기의 2~4배 정도의 완전한 용혈대를 형성한다. 5~10세 소아의 상기도와 피부에 정착하며, 급성인두염, 성홍열, 류마티스열, 급성사구체신염, 균혈증, 골수염, 심내막염, 수막염, 피부감염, 등을 일으킨다.

연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 4. Group L Streptococcus catalase - / β-hemolysis pattern / bacitracin resistance Lancefield group이 L인 streptococcus로서, L 항원을 가지는 Streptococcus dysgalactiae가 Group L Streptococcus에 해당한다. Mastitis Polyarthritis

5. Streptococcus mutans catalase - / γ-hemolysis pattern 용혈대를 형성하지 않음. 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 5. Streptococcus mutans catalase - / γ-hemolysis pattern 용혈대를 형성하지 않음. 대표적인 충치 유발균 - Pin-point colony 형성

1. Staphylococcus aureus 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 1. Staphylococcus aureus 왜 함께 보는가? 2. Streptococcus viridans 3. Streptococcus pyogenes 4. Group L Streptococcus 5. Streptococcus mutans 각각 α, β, γ-hemolysis pattern을 나타내는 대표적인 균주 catalase – 인 Streptococci (2, 3, 4, 5) 그 중에서… α-hemolysis pattern을 보이는 viridans β-hemolysis pattern을 보이면서 bacitracin disk test에 sensitivity를 나타내는 pyogenes β-hemolysis pattern을 보이면서 bacitracin disk test에 resistance를 나타내는 Group L Strepto. γ-hemolysis pattern을 보이는 mutans

+ - + - CATALASE TEST CATALASE TEST O-F TEST HEMOLYSIS PATTERN COAGULASE TEST M. luteus α β γ + - OPTOCHIN TEST BACITRACIN TEST BACITRACIN TEST S. aureus S. epidermis S. mutans S R S R MSA S. pneumoniae S. pyogenes DNase S. viridans Group L Strepto.

1. Catalase test 오늘은 catalase test +/- 를 비교해볼 수 있다!!! ^__^ 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 1. Catalase test 오늘은 catalase test +/- 를 비교해볼 수 있다!!! ^__^ ※ 원리 Catalase + Catalase - family Micrococcaceae (Staphylococcus, Micrococcus)와 family Streptococcus의 감별시험 - 슬라이드에 3% H2O2 한 방울을 떨어뜨리고, 백금이로 집락을 떠서 반응시킨 후, O2 거품의 생성 여부를 확인한다. 3% 2H2O2 2H2O + O2 ↑ : family Micrococcaceae ※ 주의할 점 H2O2 는 체액이나 혈액 성분에 포함되어 있는 catalase에도 반응하므로 BAP에서 균을 취할 때는 배지 성분이 백금이에 닿지 않도록 한다.

2. Hemolysis pattern ① α-hemolysis pattern (partial hemolysis pattern) 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 2. Hemolysis pattern genus Streptococcus 동정을 위해서 가장 먼저 관찰해야 할 중요한 성상이다. Blood agar plate에 접종한 후 mono colony 주변에서 hemolysis pattern을 판독해야 한다. α  β 또는 γ  α 로 잘못 판독할 수 있기 때문이다. ① α-hemolysis pattern (partial hemolysis pattern) BAP 안에 포함된 혈액의 hemoglobin이 불완전 용혈로 인하여 CO2와 결합하여 methemoglobin으로 환원되면서 배지가 녹색으로 보인다. α-hemolysis가 일어난 적혈구를 현미경 검경해보면 적혈구의 막은 정상임을 확인할 수 있다. 즉, 불완전한 부분 용혈이다. ② β-hemolysis pattern (complete hemolysis pattern) red blood cell이 완전히 용혈되어 mono colony 주변에 투명하고 무색인 β-hemolysis pattern을 나타낸다. ③ γ-hemolysis pattern 용혈이 전혀 일어나지 않아서 변색이 나타나지 않는다. ④ α’-hemolysis pattern (partial hemolysis pattern) colony 주변의 RBC를 보이는 용혈현상 중에서 α와 β의 중간적인 용혈현상을 띄는 경우를 말하는데, 육안적으로 관찰하였을 때 β-hemolysis pattern 과 혼동하기 쉽다.

1개의 colony를 취하여 BAP에 3차 streaking을 실시한다. 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 ② 실험방법 1개의 colony를 취하여 BAP에 3차 streaking을 실시한다. 18시간 이상 배양한 후, 3차에서 mono colony 주변부에서 hemolysis pattern을 판단한다.

α-hemolysis pattern (partial hemolysis pattern) Streptococcus viridans

β-hemolysis pattern (complete hemolysis pattern) Staphylococcus aureus

β-hemolysis pattern (complete hemolysis pattern) Streptococcus pyogenes

β-hemolysis pattern (complete hemolysis pattern) Group L Streptococcus

γ-hemolysis pattern Streptococcus mutans

α-hemolysis vs β-hemolysis pattern 구분!!!! Streptococcus viridans Streptococcus pyogenes

3. Bacitracin susceptibility 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 3. Bacitracin susceptibility bacitracin ① 원리 Bacitracin은 눈이나 피부의 국소 감염시 처방하는 gram+ bacteria에 대한 항생제이다. S. pyogenes는 0.02~0.04 unit 농도의 bacitracin에 감수성(susceptibility)을 가지는 특성을 가진다. 이를 이용하여 β-hemolysis pattern을 일으키는 family Streptococcus 중에서 S. pyogenes와 Group L Strepto. 감별시험에 활용된다. Bacitracin disk test에서 감수성 여부는 억제대의 지름이 13mm 이상인지 여부에 따라 판단한다. 13mm 이상 13mm 이상

BAP에 3개의 colony를 취하여 도말한다. loop 또는 멸균된 면봉을 사용한다. 연세대학교 임상병리학과 임상미생물학연구실 ② 실험방법 BAP에 3개의 colony를 취하여 도말한다. loop 또는 멸균된 면봉을 사용한다. 균을 골고루 접종한 뒤에 bacitracin disk를 부착하고, 떨어지지 않도록 지긋이 눌러준다.