STA-R Evolution EXPERT 을 이용한 Free Protein S 검사 진단검사의학과 혈액학파트 2010 년 11 월 04 일 김 선경

목 차 Protein S 란? 평가 배경 검사 방법 소개 평가 결론

Major Inhibitors of Coagulation Antithrombin (AT) Z-Dependent Protease Inhibitor Tissue Factor Pathway Inhibitor Activated Protein C (APC) Protein S (cofactor for APC)

Protein S Produced by the liver - Vitamin K dependent 2 forms of Protein S Free PS (about 40%) PS – C4b BP

Protein S Physiological variation Acquired deficiency - At birth, low total PS, but normal free Ps level - Total and free PS levels are lower in woman than in man, increase with age - PS levels decrease during pregnancy Acquired deficiency - Oral Anticoagulant therapy, DIC, liver disease, Oral contraception, nephrotic syndrome, AIDS, inflammatory syndrome (C4bBP )…

Protein C Pathway Activation PS V inactive APC II Va Xa Activated Platelet PC EPCR TM Endothelial cell APC Thr Thrombomodulin (TM)-Thrombin (Thr) complex activates Protein C bound to Endothelial Protein C Receptor (EPCR) PS VIII inactive APC VIIIa X IXa Activated Platelet Activated Protein C (APC) binds Protein S (PS) and inactivates Va and VIIIa

평 가 배 경 검사자의 숙련도가 필요, 검사시간이 오래 걸림  동일 바코드 부적합 검체 시 보고시간이 지연됨 평 가 배 경 ● 현재 시행하고 있는 수기법의 경우 검사자의 숙련도가 필요, 검사시간이 오래 걸림 ● PC와 PS의 결과 보고 시간이 서로 다름  동일 바코드 ● 정규시간외 접수된 검체는 냉동보관 부적합 검체 시 보고시간이 지연됨

검사방법 소개 Asserachrom Free Protein S (Enzyme lmmunoassay for Free Protein S) - 2010. 11월 현재 본원검사 방법- STA-Liatest Free Protein S (Immuno-Turbidimetic Assay Of Free Protein S)

Asserachrom Free Protein S (Enzyme lmmunoassay for Free Protein S) - 2010. 11월 현재 본원검사 방법- Kit Reagents ● Reagent 1 : 16 – well strip coated with the first monoclonal anti-human free Protein S fragments. (coated strip) ● Reagent 2 : Anti-free PS peroxidase ● Reagent 3 : tetramethylbenzidine (TMB) solution ● Reagent 4 : TRIS buffer (dilution Buffer) ● Reagent 5 : washing solution ● Reagent 6 : Free Protein S calibrator ● Reagent 7 : Free Protein S control `

검사 방법 Worklist 출력 후 건수 확인 시약준비, sample, Q.C calibrator 준비 검사 방법 Worklist 출력 후 건수 확인 시약준비, sample, Q.C calibrator 준비 - calibration Calibrator level(%) t T:2 T:4 T:8 T:16 Reagent 6 (㎕) 50 Starting solution or Its dilution(㎕) 500 Reagent 4 (㎕) 1000

- control - Sample : 검체 50 ㎕ + Tris 1㎖ 1:21 dilution ① control (R7) + D.W 500㎕ 30분 실온방치 ② 제조된 control은 2가지 dilution 사용 1:21 dilution <제조된 control 50 ㎕ + R4 1 ㎖> 1:41 dilution <제조된 control 25 ㎕ + R4 1 ㎖> - Sample : 검체 50 ㎕ + Tris 1㎖ 1:21 dilution

③ free Protein S Ab가 부착된 well에 준비된, 검체 control/cal 200 ㎕씩 분주 ④ R2 (Anti-free PS peroxidase) 50 ㎕ 씩 분주 ⑤ 실온 1hr incubation ⑥ washing ⑦ 발색 : R3 200 ㎕ 넣고 실온 5분 incubation ⑧ 1M H2SO4 50 ㎕ 15분 incubation ⑨ Reading ⑩ Result ㎕

STA-R Evolution Overview STA-Liatest Free Protein S (Immuno-Turbidimetic Assay Of Free Protein S) STA-R Evolution Overview

장비 내부 구조

Viscosity -based detection 장비 측정 원리 Viscosity -based detection Colorimetry Immuno -Turbidimetry 405 nm 540 nm

Kit Reagents - Reagent 1 : HEPES buffer - Reagent 2 : Latex Free PS - STA – Owren – Koller (OK buffer) - Desorb U - control N + P

검사방법 ① 준비된 시약을 기기에 장착한다. R0 ⇒ Calibrator , Q.C, Ok buffer, Desorb U R1 ⇒ buffer R2 ⇒ Latex Free PS

② calibration

③ Q.C

④ sample 장착 및 loading

- 검체량이 소량인 경우(최소 500uL)

⑤ 분 석

평 가 Total QC Precision Sample Correlation AMR 검증 (10 ~ 150 %) 정상치 설정

Total QC Precision Acceptable CV : < 20% Instrument : STA – R Evolution Expert Series Tested Item : Free Protein S Tested date : 2010.07.19~2010.07.23(Total 5days) Sample material : STA-Liatest Control N+P (lot. 105658) Total QC Point : 20Points / Test level Unit : ug/ml Acceptable CV : < 20%

Sample Correlation Free Protein S Tested Item : Free Protein S Used Reagents : Asserachrom Free Protein S and STA-Liatest Free Protein S (lot no. 105795) Tested date : 2010.08.04 Instrument : STA-R Evolution Expert Sereis Sample material : Patient samples Unit : % Sample Correlation

Free Protein S Tested Item : Free Protein S (10.09.28) Used Reagents : Asserachrom Free Protein S and STA-Liatest Free Protein S Tested date : 2010.09.28 Instrument : STA-R Evolution Expert Sereis Sample material : Patient samples

결 론 장점 : 재현성, 검사과정 간편, TAT 감소 비급여수가 : 14,118원 건수 : 100건/월 과제 : 결 론 장점 : 재현성, 검사과정 간편, TAT 감소 비급여수가 : 14,118원 건수 : 100건/월 과제 : 정상치 재설정 필요 기존검사방법과 STA-R 의 검사방법차이 ( 70~ 130% -> M: 89.5~128.5 %, F: 71~113 % )