인체기생충학 (7강) - 원충류 (포자충류-말라리아)

포자충류(Sporozoa) 총론 개 요 정의 : 생물체가 포자생식을 행하는 것으로 접합자낭 속에서 핵분열을 일으켜 개개의 핵이 포자충이 되어 방출하는 형태(p.42), 원충류중 포자를 형성하여 생식을 하는 원충류를 포자충이라함 세대교번(世代交番) : 무성생식기(다수분열 (schizogony))와 유성생식기(포자생식(sporogony))을 가진다. 충체 외부로 돌출되는 운동기관이 없다 포자충류는 예외없이 기생생활을 한다. 포자충류의 분류 학 명 기생부위 진단방법 중간숙주 종숙주 Plasmodium vivax (삼일열말라리아) 간실질세포 (전적혈구기) 적혈구 혈액검사 사람 모기 (Anopheles sp.) Plasmodium malariae (사일열말라리아) Plasmodium falciparum (열대열말라리 아) Plasmodium ovale (난형열말라리아) Toxoplasma gondii (톡소포자충) 핵이있는 모든 세포,기관 인수공통기생충 생검, 색소시험, 보체 결합반응 사람,개,쥐, 소,돼지,양, 조류 등 고양이 Isospora belli (사람등포자충) 소장 대변검사 없다 Pneumocystis carinii (폐포자충) 사람 폐포 객담도말 폐포세척액 (bronchoalveola r lavage:BAL) -

말라리아원충(Plasmodium sp.) 개 요 정의 말라리아는 Plasmodium라 불리우는 혈액 기생충 질환으로 암(♀) 모기의 흡혈로 인해 전염되는 질환이다. 말라리아는 학질(瘧疾)이라 하여 우리나라에도 오래전 부터 알려진 열병 malaria 어원: mal(=bad), aria(=air)의 복합어로 옛사람은 말라리아가 나쁜공기 탓이라 생각 역사 프랑스의 의사 Laverran이 알제리의 한 환자에서 처음으로 원인 원충을 발견-노벨상 수상 Shortt(1948)가 인체내에서 Pre-erythrocytic stage(전적혈구기)가 있음을 증명 뇌매독이 고온에 약하다는 점을 이용하여 열원충을 매독치료에 사용 -노벨상 수상 종류 삼일열원충(Plasmodium vivax) 사일열원충(Plasmodium malariae) 열대열원충(Plasmodium falciparum) 난형열원충(Plasmodium ovale)

세계적현황 전세계적인 분포를 보이며 일부지역에서는 효과적인 방제로 감소 또는 중지 되었다가 최근엔 이상기온 및 약 제내성균주의 증가, 살충제에 대한 저항성 증가 등으로 다시 확산되고 있는 추세. 현재 지구상에서 가장 인류를 위협하는 질환 (33억명이 말라리아 위험 지역 거주, 매년 2억 5천만명 말라리아 감염, 연간 약 1백만명 이상 사망) 세계보건기구(WHO)가 선정한 6대 열대병 중에서 1위 전세계의 40%, 100여개국 이상이 말라리아로 고생 국내 현황 주발생지역 – 경기,강원도 북부지역(파주, 연천, 철원,포천, 김포 등) 1970년대 후반 거의 소멸된 것으로 보였으나 1993년 경기북부 휴전선 부근에서 외국 여행 경험 없는 병사 삼일열말라리아 발병 후 최근까지 매년 2,000명 가량 발병 하는 추세 휴전선 부근에서 동서와 남부지방으로 확산되는 경향을 보임(인천,서울, 태안읍에서 민간인 발생) 북한 상황(WHO 보고) : 1997년부터 발생하여 2001년에 약 30만명이 감염 되었으며 이 추세 지속적 우리나라에서 유행하는 말라리아의 종류는 삼일열말라리아(Plasmodium vivax)이며 학질모기과 Anopheles sp.에 속하는 중국얼룩 날개모기(Anopheles sinensis)가 농촌지역에 서식하므로 외국에서 삼일열말라리아 환자가 계속 들어올 경우 말라리아 재정착 가능성 존재.

말라리아 생활사(Life cycle) 말라리아는 사람의 체내에서 무성생식(다수분열,Schizogony)과 모기체내에서의 유성생식(포자분열,Sporogony)로 나누어 진다.

말라리아 생활사(Life cycle) 모기체내에서의 유성생식(포자분열,Sporogony) 모기가 감염 인체 흡열시 인체내 있던 암수생식모세포(macro-& micro gametocyte) ->모기체내에서 암생식세포와 수생식세포 (macro-& micro gamete) 로 되어 수정 ->접합체(zygote) ->충양접합체(운동접합체,ookinete)->낭포체(난포낭, oocyst)->sporocyst ->포자(소)체(sporozoite): 10-15 um의 길쭉한 형태->체강 으로 유리후 모기 침샘으로 이동 사람의 체내에서 무성생식(다수분열,Schizogony) 모기 침샘의 포자(소)체(sporozoite)가 인체 혈관내 들어오면 sporozoite는 대식세포에 의해 파괴되나 일부가 직접 또는 쿠퍼세포를 통해 간세포에 침투(전 적혈구분열생식 주기: 6-16일) ->sporozoite가 분열체(schizont)로 성숙 ->간세포가 파괴되며 분열체내의 분열소체(merozoite)가 주변 조직과 혈류에 들어감 ->간세포 밖으로 나온 merozoite는 간의 굴 모양 혈관에서 적혈구에 침입 (적혈구분열생식 주기: 발열주기발생 :삼일열 열대열 난형열은 48시간-격일 간격 열발작 /사일열은 72시간-3일 간격 열 발작-말라리아중 무성생식기간이 제일 길다 ) ->반지형(ring form),영양형(trophozoite)을 거쳐 분열체(schizont)로 성숙 ->적혈구를 파괴하고 분열소체(merozoite)가 나와 RBC 재감염 ->분열소체(merozoite) 일부는 암수생식모세포(macro-& micro gametocyte)로 성장

삼일열원충(Plasmodium vivax): 지리적으로 가장 넓게 분포 온대,아열대, 열대 Wright’s or Giemsa stain : 세포질은 청색, 핵은 적색 원충이 감염된 적혈구는 정상 적혈구보다 휠씬 증대 윤상체(=반지형,ring form), 아메바상, 분열체(schizont), 생식모세포 (gametocyte) 등이 비교적 잘 발견 적혈구내의 혈색소를 소화하여 생긴 특이한 담홍색의 Schuffner반점(Schuffner dot)이 나타남 merozoite(분열소체)수 : 12~24개 무성분열 소요시간 : 48시간 한 적혈구에 여러 개 충체가 들어있는 경우 드물다

사일열원충(Plasmodium malariae) : 아열대, 열대에 분포 삼일열 원충보다 더 짙은 청색으로 염색 원충이 감염된 적혈구는 증대되지 않는다. 영양형 또는 분열체에서 대상체(band form)를 형성하는 것이 특징 감염 적혈구 세포질 내에 Ziemman 반점이 담홍색으로 나타나며 merozoite 가 국화꽃 모양으로 배열 merozoite(분열소체)수 : 6~12개 무성분열 소요시간 : 72시간 한 적혈구에 여러 개 충체가 들어있는 경우가 가끔있다

열대열원충(Plasmodium falciparum) :아열대, 열대에 분포 윤상체는 다른 종류보다 적으며 한 적혈구 내에 윤상체가 2개 이상 감염/ 또는 적혈구 막 근처에 있는 윤상체(marginal ring form) 감염 적혈구 세포질 내에 Maurer반점이 담청색 염색 생식모세포가 반월형(crescentic form) 또는 바나나형(banana form) 으로 나타남 말초혈액에서 윤상체와 생식모세포 단계가 주로 나타나며 영양형과 schizont(분열체)가 나타나는 경우 사망 직전과 같이 심각한 단계 무성분열 소요시간 : 24~48시간

난형열원충(Plasmodium ovale) : 분포가 국소적으로 아프리카,중동, 동남아 등 정상적혈구보다 증대됨 감염 적혈구는 모양이 난형으로 변하고 세포질내에 Schuffner반점이 나타남 삼일열원충과 비슷하나 가장 뚜렷한 차이는 감염된 적혈구 표면에 날카롭게 뻗어 있는 돌기가 관찰됨. merozoite(분열소체)수 : 6~12개 무성분열 소요시간 : 48시간

병리와 증상 감염적혈구의 파괴 - 혈장내에 merozoite, 파편, 색소, 적혈구 파괴물질등의 이종 단백질이 존재 특유의 열 발작과 많은 적혈구의 파괴로 인해 심한 빈혈 발열외에 두통, 비종대, 혈소판 감소,콩팥합병증 발생 삼일열원충은 간 조직 등에 잔여로 남아 있다가 2~3년 후에도 재발 열대열원충에서는 흑수열(black water fever)이 나타나며 말라리아중 병원성이 가장 강함 임상적 경과 1)오한 전율기(cold stage): 수분내지 한 시간 동안 오한, 두통,구역 2)발열기(hot stage): 3-6시간 동안 건조한 피부, 빈맥, 빠른 호흡 3)발한기(wet stage): 땀 배출 진단 및 검사법 확진: 혈액도말표본에서 말라리아 원충 발견 – 박층도말(종감별 용이), 후층도말(집단검사, 감염여부 판정) 급성기의 말초혈액 채혈은 발열 직전과 직후에 실시하여 적혈구 내에서는 윤상체 발견 염색방법 : Wright stain, Giemsa stain 검경은 1000배 유침렌즈로 최소 100 시야 이상 검경 음성판정: 급성기-하루 3회 3일간 검사/ 만성기-1주간 1회씩 8주간 검사하여 원충 미발견시 음성판정

예방 집단관리법 - 환자를 신속히 치료함으로써 모기가 생식모세포에 감염되지 않도록 하는 방법 여러 가지 기술을 이용하여 모기를 구제하는 방법 개개인이 모기에 물리지 않도록 예방하는 방법 효과적 백신 아직 개발 안됨 치료-치료 약제는 무수히 많은 종류가 있음 WHO는 내성생성 방지를 위해 두가지 이상 약제 병합 사용 권장 합병증 동반시 철저한 감시와 보존적 치료 병행 해외여행시의 예방법 - 모기에 물리지 않는 것: 곤충기피제,모기장, 모기스프레이, 노출이 적은 옷 착용 항말라리아제 예방약 복용법 1)chloroquine: 말라리아 표준 예방약,여행 1주전부터 귀국 후 4주 까지 복용 전방 근무자에 chloroquine 지급 부작용-피부염증, 어지러움, 탈모를 유발하나 부작용이 심한 것은 아님 타지역에서 발생하는 말라리아는 chloroquine에 내성이 있어 다른 예방약 필요 2)mefloquine: chloroquine에 내성이 있는 경우 사용 부작용 심함(움직이는 것 조차 힘들다, 여행가서 누워만 있다 왔다, 차라리 안 먹고 유행지역에 안 가겠다) 3)fansidor

말라리아 매개 모기 학질모기(Anopheles hyrucanus ) 얼룩날개모기, 우리나라는 중국얼룩날개모기(Anopheles sinensis )가 매개 모기의 서식 환경 조건 온도는 모기의 수명과 모기체내 열원충 발육에 영향을 주어 말라리아 전파의 계절적 변동이 발생 중요 인자인 온도는 20-30 ℃가 적당하며 16 ℃이하가 되면 모기체내 열원충 발육이 충단 된다. 더운 지역에 말라리아가 만연하는 것은 기온과 밀접한 관계 습도가 높으면 감염모기가 오래 생존 할 수 있으므로 비교 습도가 60% 이상 되어야 한다. 모기는 후각이 발달하여 이산화탄소, 젖산, 암모니아, 요산, 땀냄새, 발냄새, 향수,화장품 냄새를 좋아함. 여름밤의 모깃불: 연기속 이산화탄소를 따라 가도록 유도하는 방법 (모기가 쑥 냄새를 싫어한다?)

우리나라의 말라리아의 발생현황 동의보감 : 학질, 복학, 하루걸이 등으로 기재 1913년 일본인 Hasegawa가 한국에 말라리아가 존재함을 기술 1913년 일본인 Himeno가 한국의 말라리아형이 임상적 특성상 삼일열 말라리아라고 기술 연도별 발생현황 1960년대 - WHO와 한국정부의 지원아래 말라리아 박멸사업을 시작 1970년대 - 토착형 말라리아 발생은 해를 거듭할수록 줄어 70년대 후반에는 거의 환자가 발생하지 않음 원인) 수동적인 환자발견사업의 효과, 항말라리아제인 Chloroquine의 사용, 잔류독성 살충제 DDT의 사용 1980 ~ 1990년대 - 토착형 말라리아는 1983년 보고를 마지막으로 완전히 사라짐 1993년 - 외국여행이 전혀 없는 전방 철책선 부근의 한 병사에서 토착형으로 추정되는 말라리아가 발생 1994년 - 동일한 지역에서 21명의 병사에서 동일한 말라리아가 발생 1995년 - 81명의 환자발생 1996년 - 450명의 환자발생 1997년 -1600명 이상의 환자발생 1998년 - 3800명 이상의 환자발생 1999년 - 3400명 이상 환자발생

말라리아 발생현황 통계(2003,2004년)

말라리아 발생현황 통계(연도별,신분별 환자발생상황)

말라리아 통계(시도별)

말라리아 통계(발생 ,사망통계)

말라리아 통계(2002년 월별)

말라리아 통계(연령별)

말초혈액 표본에서 발견되는 인체기생 말라리아 원충의 감별점 Compact한 원형 또는 band형을 나타낸다. 숙주세포는 변화하지 않 는다. 말초혈액 내에 나타나지 않는다. 가장amoeboid상, 공포를 형성, 숙주 세포가 커진다. Schuffner’s dots가 숙 주세포(RBC)에 나타남 영양형 (Trophozoite form) P. vivax와 같다. 약간 두텁다 숙주세포의1/6~1/2을점유, double dots,또는 multiple infection을 흔히본다. RBC 증대,윤상체가 직경의 1/3~1/2 을 점유 윤상체(Ring form) 모든 발육단계 윤상체와 생식모세포에 한함 말초혈액내의 존재 여부 사일열원충 (P. malariae) 열대열원충 (P. falciparum) 삼일열원충 (P. vivax)

분열체 (Schizonts) 자성생식모세포 (Macrogametocyte) 웅성생식모세포 (Microgametocyte) 방사선형으로 배열된 merozoite의 수가 6~12개, 중심에는 malaria pigment가 있다. 숙주세포는 커지지 않는다. 말초혈액 내에 나타나지 않는다. Merozoites의 수는 12~24개이다. 숙주세 포가 커진다. Schuffner’s dots가 나타난다 분열체 (Schizonts) 72시간 24~48시간 48시간 무성분열소요시간 크기를 제외하고는 P.vivax와 형태 가 비슷하다 감별이 곤란하다. 두텁고 둔원형 이고 염색력이 약하다. 핵은 산재성이다. 전자보다 약간 작다(10~12u). 전체로 염 색력이 약하다. 세포질은 밝은청색, 핵은 진 하게 염색되어 중앙에 위치한다. 웅성생식모세포 (Microgametocyte) P. vivax와 같으나 정상숙주세포 (RBC)보다 크다. 바나나 형으로 양단이 약간 point. blue cytoplasm, compact red nucleus와 pigment는 거의 중심으로 위치한다. RBC보다 훨씬 크다. 유원형의 세포질은 진한청색으로 염색된다. 염색질이 많은 핵은 진한 적색으로 염색되고 체 주변에 있다. 크 기12~14u, 색소가 많다 자성생식모세포 (Macrogametocyte)

ATLAS) Plasmodium vivax 삼일열말라리아의 윤상체(ring form) 단계 숙주세포(RBC)에 말라리아 원충이 1마리 감염 Thin blood smear(박층도말 표본) 염색 : Giemsa stained

ATLAS) Plasmodium vivax 삼일열말라리아의 영양형(Trophozoite) 단계 Thin blood smear, Giemsa stained 영양형 단계에서는 말라리아 원충의 형태가 "Amoeboid form”으로 발육 감염 적혈구의 크기는 주변의 적혈구보다 팽대해진다 Schuffner's dots가 적혈구 표면에 출현한다

ATLAS) Plasmodium vivax 삼일열말라리아의 미성숙 분열체(Immature schizont) Thin blood smear, Giemsa stained 분열체는 2-24 nuclei이 분열됨 Schuffner's dots는 담홍색으로 적혈구(RBC)에 나타남

ATLAS) Plasmodium vivax 삼일열말라리아의 성숙 분열체(Mature schizont, containing 12-24 merozoites) Thin blood felm, Giemsa stained Schuffner's dots가 적혈구(RBC)에 나타남 감염 된 적혈구는 불규칙적인 모양

ATLAS) Plasmodium vivax 삼일열말라리아의 Gametocyte, female Thin blood film, Giemsa stained 난형의 모양, 핵은 짙게 염색되고 cytoplasm은 진한 청색 Schuffner's dots는 fine reddish dots형태로 RBC에 보임

ATLAS) Plasmodium vivax 삼일열말라리아의 Gametocyte, male Thin blood film, Giemsa stained 난형의 모양, 핵과 세포질은 female보다 엷게 염색됨 감염 된 적혈구의 모양은 불규칙적, pale color이며 크기는 팽대함.

ATLAS) Plasmodium malariae 사일열말라리아의 윤상체(ring form) 사일열말라리아에 감염 된 RBC(적혈구)는 주변의 RBC의 크기와 비슷 – 삼일열말라리아와의 차이점 Thin blood film, Giemsa stained

ATLAS) Plasmodium malariae 사일열 말라리아의 영양형(trophozoite) Thin blood film, Giemsa stained cytoplasmic은 "Compact form"으로 발육 "owl eye" 모양 감염 된 적혈구는 주변의 RBC 보다 적거나 동일 크기를 가진다 Cytoplasm은 Yellow-brown pigment

ATLAS) Plasmodium malariae Thin blood film, Giemsa stained 사일열말라리아는 종종 "Band form" 모양을 가짐 Thick blood film에서는 발견되지 않음 thin blood film smear 상에서 end 부분에서 보임

ATLAS) Plasmodium malariae 사일열말라리아의 미성숙분열체(Immature schizont, 2-12 nuclei) Thin blood film, Giemsa stained 감염 된 적혈구는 주변의 RBC 보다 적거나 크기가 비슷하다

ATLAS) Plasmodium malariae 사일열말라리아의 성숙분열체(6-12 merozoites, average 8) Thin blood film, Giemsa stained 분열 된 Merozoites는 일반적으로 “rossette“ form 감염 된 적혈구는 주변의 RBC보다 작다

ATLAS) Plasmodium malariae 사일열말라리아의 Gametocyte, female Thin blood film, Giemsa stained 난형의 모양, compact nucleus and cytoplasm is bluish

ATLAS) Plasmodium falciparum 열대열말라리아의 윤상체(ring form) Thin blood film, Giemsa stained 특징) RBC내에 double 또는 multiple infection 됨

ATLAS) Plasmodium falciparum 열대열원충의 ring form(윤상체)

ATLAS) Plasmodium falciparum 열대열 말라리아 Thin blood film, Giemsa stained Gametocyte 바나나 모양

ATLAS) Plasmodium falciparum 열대열 말라리아 Thin blood film, Giemsa stained Gametocyte 바나나 모양

ATLAS) Plasmodium ovale 난형열 말라리아의 성숙 분열체(6-12 merozoites, average 8) Thin blood film, Giemsa stained 특징) 난형열말라리아에 감염된 RBC의 모양은 난원형의 상태 감염 된 적혈구는 주변의 RBC보다 팽대 Schuffner's dots가 존재  

ATLAS) Plasmodium falciparum Anopheles gambiae biting. Malaria is transmitted by female Anopheles mosquitoes

기생충 포자충류 확인문제 문제 1] 말라리아로 의심되는 혈액을 도말 후 Giemsa stain한 결고 RBC내 바나나 모양의 Gametocyte를 발견했다. 의심되는 기생충은 ? (정답 ㄷ) ㄱ. 삼일열 말라리아 ㄴ. 사일열 말라리아 ㄷ. 열대열 말라리아 ㄹ. 난형열 말라리아 문제 2] 다음 중 인체 기생 원충류 중 가장 큰 영양형을 가지는 기생충은? (정답 ㄴ) ㄱ. 이질아메바 ㄴ. 대장섬모충 ㄷ. 질트리코모나스 ㄹ. 대장아메바 문제 3] 다음 중에서 “말라리아”를 전파시킬 수 있는 것으로 가장 적합하게 조립된 것은 ? (정답 ㄴ) 가. Anopheles 모기 나. 오염된 물 다. 수혈 라. Culex 모기 ㄱ. 가-나-다 ㄴ. 가-다 ㄷ. 나-라 ㄹ. 라 ㅁ. 가-나-다-라

문제 4] 우리나라에서 유행하는 말라리아의 종류는 ( )말라리아이며 학질모기과에 Anopheles sp.에 속하는 ( )모기가 감염매개체이다. 빈 괄호를 순서에 맞게 나열된 것은? (정답 ㄷ) ㄱ. 삼일열 - 토코숲모기 ㄴ. 사일열 – 작은빨간지모기 ㄷ. 삼일열 - 중국얼룩날개모기 ㄹ. 사일열 - 중국얼룩날개모기 문제 5] 사일열 말라리아의 무성분열 소요시간은 ? (정답 ㄹ) ㄱ. 24시간 ㄴ. 48시간 ㄷ. 24-48시간 ㄹ. 72시간

선생님 안녕하세요? Malaria자료는 박지혜선생이 혈액파트 워크샾 할때 사용했던 자료입니다 필요하신쪽만 사용하시고 필요한 자료있으면 말씀하십시요

구분 P. vivax P. falciparum P. malariae P. ovale PB상의 현미경적 감별점 “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” PB상의 현미경적 감별점 구분 P. vivax P. falciparum P. malariae P. ovale 감염 RBC 크기 커짐 커지지 않음 커지지 않음 커짐(난형) 염색성 옅어짐 정상 정상 옅어짐 dot schuffner’s maurer’s ziemann’s schuffner’s Ring form 큼 작음 삼일열 보다 작음 삼일열과 비슷 Trophozoite amoeboid 보이지 않음 band form round, compact merozoite 수 12-24 8-26 6-12 6-12 Gametocyte RBC보다 큼 바나나 모양 삼일열 보다 작음 삼일열 보다 작음

전세계 말라리아 검사의 “gold standard” “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” Malaria - Method for detection 전세계 말라리아 검사의 “gold standard” : 여전히 현미경 검경법. (thick and thin blood film) 현미경 검경법 : 인적 기술력 필요, 시간 소요 등의 문제가 있음. 현미경 검경 으로 인한 확진 전에 Auto analyzer 의 cbc&diff data 분석을 통한 말라리아 screening 가능.

1) 말라리아에 의한 적혈구 파괴로 HGB, MCHC, MCH 감소. 2) Platelet 감소. “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” Malaria infection - 일반적인 검사에 의한 말라리아 의증진단. 1) 말라리아에 의한 적혈구 파괴로 HGB, MCHC, MCH 감소. 2) Platelet 감소. 3) 활성화된 Lymphocyte 와 monocyte 증가. 4) Very Low to mostly no : Hb, Eosinophils. 5) GOT/GPT, T.B 증가.

VCS 를 이용한 WBC hitogram 측정. WBC histogram 35 Femtoliter threshold에 “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” Malaria Screening with LH 750 VCS 를 이용한 WBC hitogram 측정. WBC histogram 35 Femtoliter threshold에 Peak 생성. ( Normal Histogram )

- Coulter의 VCS 3D cube를 통해 계산되어지는 수치. “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” Cell Population Data 정의 - Coulter의 VCS 3D cube를 통해 계산되어지는 수치. - Diff Data, Retic Data, NRBC Data 에 부가적인 수치. - 각 세포(Cell)의 군집(Population)에 대한 통계학적 수치.

Malaria factor= 5.99 (cut off >3.7) “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” * Malaria factor = (Lymphocyte SD of Volume x Monocyte SD of Volume) / 100 Malaria factor= 5.99 (cut off >3.7)

( normal ) * Malaria 25,57 x 28,62 /100 = 7,32 (Malaria) “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” * Malaria 25,57 x 28,62 /100 = 7,32 (Malaria) 12,12 x 19,99 /100 = 2,42 (normal) ( normal )

Malaria Screening With XE-5000 “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” Malaria Screening With XE-5000 반도체 레이저를 이용한 flow cytometry 법. 측방 산란 광과 측방 형광의 정보를 검출하여 4DIFF Scatter gram을 얻음.

VCS 원리를 이용한 LH750 에서의 말라리아 screening 방법. “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” Consideration (1) VCS 원리를 이용한 LH750 에서의 말라리아 screening 방법. - WBC histogram의 35 Femtoliter threshold에 Peak 생성 확인 - CPD를 통한 Malaria Factor 확인 ( sencitivity 96.9%, specificity 82.5%) flow cytometry 원리를 이용한 XE-5000 말라리아 screening 방법. - WBC histogram의 pseudo-eosinophil 확인 ( sencitivity 38.9%, specificity 100%) - 4가지의 Abnormal WBC histogram의 확인 ( sencitivity 52.1%, specificity 100%)

빠른 시간 안에 자동화된 CBC Analyzer Data 파악을 통한 malaria screening 가능 . “첨단의료를 선도하는 서해안시대의 중심병원 ” Conclusion(2) 빠른 시간 안에 자동화된 CBC Analyzer Data 파악을 통한 malaria screening 가능 . 추가 비용/ 추가 시약 필요 없음 . 검사실의 Decision Rule 과 연계 사용 .

Malaria PCR 진단 유전자적 검사: PCR은 말라리아 원충의 MSP유전자와 CSP유전자 등을 특이 primer로 확인 MSP(merozoite surface protein):말라리아가 증식하면서 인접 적혈구를 침입 할 때 관여하는 merozoite 표면단백 CSP(circum sporozoite protein):말라리아가 처음 인체에 침입시 간세포에 부착하는 기능을 갖는 circumsporozoite 단백 HRP (histidine rich protein), pLDH (plasmodium lactate dehydrogenase) :원충에서 분비되는 항원 CSP, MSP, DBP 이러한 단백이 사람에서 말라리아에 대한 면역기능을 형성하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있으며 이러한 단백질은 항원으로 재조합 또는 합성하여 말라리아 항체의 진단 및 말라리아 백신으로서 중요 역할을 할것으로 생각됨 CSP (circum sporozoite protein): 말라리아가 처음 인체에 침입시 간세포에 부착하는 기능을 갖는 circumsporozoite 단백 HRP (histidine rich protein), pLDH (plasmodium lactate dehydrogenase)는 원충에서 분비되는 항원 MSP(merozoite surface protein) 말라리아가 증식하면서 인접 적혈구를 침입할 때 관여하는 merozoite 표면 단백 CSP, MSP, DBP 이러한 단백이 사람에서 말라리아에 대한 면역기능을 형성하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있으며, 이러한 단백질은 항원으로 재조합 또는 합성하여 말라리아 항체의 진단 및 말라리아 백신으로서 중요 역할을 할것으로 생각됨

Malaria PCR P.vivax P.falciparum 검체 ; Whole blood(EDTA)-냉장보관 PCR 1) DNA : GeneAll Exogene 이용 추출 3 ㎕ 2) 2X premixture : 12.5 ㎕ 3) Primer (10 pmol/㎕): 각 1 ㎕ DBP F1 : 5'-TGGGACTGTAACACTAAGAAGG-3' DBP R1 : 5'-TTCTGTGGGCAATTCTGACACG-3‘ DBP R2 : 5'-TTCATTCTCAAAAGCCACCTCG-3' PFCSP-1 : 5'-GGATCCGGAGAAAATGATGATGGAGAT-3' PFCSP-2 : 5'-AAGCTTGTCTTTAGGTTTATCAGCAGA-3' PLDH-1 : 5'-GGATCCATGGCACCAAAAGCAAAAAT-3 ‘ PLDH-2 : 5'-GATATCTTAAGCTAATGCCTTCATTC-3‘ P.vivax DBP (Duffy binding protein) Duffy 혈액형 부착 단백 PFCSP Plasmodium falciparum CSP pLDH는 원충에서 분비되는 항원 DBP – P.vivax merozoit는 rbc 침입을 위해서 duffy blood group을 필요로 하는데 이 blood group이 발현되지 않는 것은 P.vivax 감염으로 부터 보호된 것으로 간주함 DBP는 cystein rich domain을 갖는 erythocyte binbing protein에 속하며 P.vivax merozoit는 duffy blood group surface antigen 과 상호 작용이 필요하고 duffy blood group surface antigen이 없는 RBC경우 merozoite 침입으로 부터 방어되는 것으로 알려짐. P.falciparum

P.vivax P.falciparum Malaria PCR 결과 판독 EP 확인 DBP(F1+R1) - 539 bp DBP(F1+R2) - 799 bp PFCSP(1+2) - 986 bp PLDH(1+2) - 950bp P.vivax P.falciparum

1: PATIENT SAMPLE PC: POSITIVE CONTROL NC: NEGATIVE SAMPLE Malaria PCR 결과 판독 DBP1 DBP2 PFCSP PLDH Result : P.falciparum DBP1이나 DBP2에서 양성나올시 P.vivax PFCSP나 PLDH에서 양성나올시 P.falciparum 각각 둘중 하나만 양성이 나오는경우에도 양성으로 판독. 1: PATIENT SAMPLE PC: POSITIVE CONTROL NC: NEGATIVE SAMPLE