전북보건환경연구원 미생물과

토착화질환 국가표준화 관리사업 Total 1807 29 30 148(2) 119(53) 50(22) 14 96 검사월 1 2 10 Total 검사건수 132 158 215 244 167 155 125 210 194 207 1807 세균 (404) 살모넬라 29 쉬겔라 비브리오 15 30 병원성대장균 캠필로박터 클로스트리디움 9(0) 13(0) 23(0) 30(0) 18(2) 8(0) 2(0) 28(0) 17(0) 148(2) 스타필로 12(4) 12(7) 24(11) 19(9) 11(5) 3(1) 5(2) 10(5) 11(3) 12(6) 119(53) 바실러스 4(2) 9(4) 6(2) 11(4) 2(1) 50(22) 리스테리아 여시니아 바이 러스 (126) Norovirus GI Norovirus GII 14 Group A Rotavirus 21 18 17 19 12 96 Adenovirus Astrovirus 원충 (7) Giardia lamblia

월별 채취 검체

분리세균의 월별 분포

로타바이러스의 월별 분포

Clostridium,Bacillus, Staphylococcus 월별 분포

Staphylococcus aureus의 월별 분리율

Bacillus cereus의 월별 분리율

병원성 미생물의 분리현황

병원성 미생물의 분리현황 (상재균 제외)

분리균의 연령별 분포

분리균의 연령별 분포

추가 실험내용 및 자료 Bacillus cereus Camphylobacter jejuni 구토 독소 Camphylobacter jejuni 분리동정 방법 Clostridium perfringens Duplex PCR(알파,엔테로톡신) Multiplex PCR (Type A 결정)

Bacillus cereus Gram(+), rod, spore forming Mannitol 비분해 Phospholipase C 생산능(lecithin 가수분해) 독소 type 설사형(diarrheal toxin) 구토형(emetic toxin )

설사형 독소들 HBL complex(hemolytic enterotoxin) 3 proteins 으로 구성 component L2, L1(by hblC,hblD) component B (by hblA) BceT (Bacillus cereus enterotoxin) one component vero cell cytotoxicity

구토형 독소(cereulide) 이 름 : cereulide 증 상 : 1-5 시간 후 나타남 독소특징 : 열,산에 안정 증 상 : 1-5 시간 후 나타남 독소특징 : 열,산에 안정 원인식품 : 조리된 쌀등 구조분석 : cyclic dodecadepsipetide 크 기 : extremely small size 항 원 성 : non-antigenicity

Emetic toxin detection Live cell method Sperm bioassay Cell culture cytotoxicity(Hep2) Mouse injection (accute liver failure) Gene amplication cereulide non-ribosomal peptide synthetase(NRPS)

증폭 유전자 및 조건들 Cereulide gene NRPS(non-ribosomal peptide synthetase)gene - Crs-F gtt aca aca atg acg gat cat a - Crs-R tat tct cta atc cca aaa gct c - 조건 94/4m, 94/30s, 55/30s/72/30s,35cycles NRPS(non-ribosomal peptide synthetase)gene - Nrps-F atc ata aag gtg cga aca aga - Nrps-R aag atc aac cga atg caa ctg - 조건 94/4m, 94/30s, 52/30s, 72/30s, 35cycles T 사(crs gene) 제품

구토독소 영동사진 (9월,crs gene)

구토독소 영동사진 M N P M N P

구토독소 T 사 영동사진 NEGA POSI 100BP

설사 및 구토독소 결과(9월) 구토독소(20%) 설사독소(45%) gene 양성/분리균주 CRS 8/40 NRPS T 사(crs) 7-8/40 hblA pcr 18/40 RPLA

Campylobacter jejuni Gram(-), curved rod, motile, Micro-aerophilic (O2 5%,co2 10%,N2 85%) 배양조건 : 37도-42도 증 상 : 설사, 열, 복통, 구토

분리동정이 어려운 캠필로 ? 신선한대변(식중독사건) 오래된 대변(토착화가검물) - 균수가 적고, 물기는 나타나지 않음 - 대부분 물기가 많고 전형적인 콜로니 - 루프바른자리에 끌리면서 증식 - 투명한 무색 콜로니 오래된 대변(토착화가검물) - 균수가 적고, 물기는 나타나지 않음 - 투명한 콜로니 위주로 pick up

실험 방법 미호기성 시험(혈액배지) 캠피응집키트(oxoid) Hippurate test Pcr gene(cadF 등) Campi api

미호기성 시험 * * * * * * * * * * * *

캠필로 사진

Clostridium perfringens Gram(+), spore-forming, anaerobic 발육최적온도( 43-45도) 발육최고온도 (50-51도) 15 toxins(major toxins: 5) Type A-E(alpha-,beta-,epsilon-, iota- enterotoxin) 대부분 type A (alpha or enterotoxin) 약 2-5%(enterotoxin)

Duplex PCR 유전자 및 조건 Plc gene Plc-F aag tta cct ttg ctg cat aat ccc Plc-R ata gat act cca tat cat cct gct Cpe-F gaa aga tct gta tct aca act gct ggt cc Cpe-R gct ggc taa gat tct ata ttt ttg tc 94도/4m,94도/30s, 55도/30s,72도/30s:35cycles

클로스트리디움 duplex toxin pcr

Multiplex PCR(Type A)

국가사업의 장단점 장 점 세균 및 바이러스의 분리능력 향상 식중독 사건시 대부분의 병원성세균 분리 장 점 세균 및 바이러스의 분리능력 향상 식중독 사건시 대부분의 병원성세균 분리 미생물과 장비 및 시약의 구입 단 점 업무 과중 일용직 임금 개선

실험에 참여한 예쁜 연구원들

전염병사업에 수고하시는 선생님들

Thank you To 여러분 To 직원들 To 연구생들