연구소 첫날 : 2007년 10월 18일 현재까지의 경과일수 : 29일 직접 해본 실험 관찰한 실험 Mice 관리 1. Mouse hemisection surgery 2. Buffer making ; 30% Sucrose 1M Tris(pH 6.8) 1.5M Tris(pH 8.8) 50 NaCl 4% PFA in 0.1M PB TBS-T 10 X TBS 2 X PB 10 X transfer buffer 3. Perfusion with rat, mouse 4. Fixation with mice 5. Embedding with mice 6. 중이염 조직을 이용한 b-tubulin western blotting 관찰한 실험 1. Total protein preparation from spinal cord 2. Gel 건조 Mice 관리 새끼분리하기, matting, 깔집갈기, 필터갈기, 총괄표작성, toe numbering 암수구별.

Mice surgery date sheet 성(姓) / Nunber 마취 소요시간 수술 날짜 몸무게(g) 마취 용량 (ml) 수술 소요시간 Injury time 비고 F /1 20071030 39 0.59 사망, 백내장 F /2 F /3 20071031 33 0.63 F /4 0.49 F /5 20071101 31 0.41 F /6 0.76 마취 완전히 안됨, 2일차 사망 F /7 26 0.31 F /8 0.46 M /10 4’00” 20071105 38 23’ (마취제외) 17:11 M /11 15’00” 37 0.47 30’(마취제외) 17:53 M /12 5’10” 46 마취 안되서 수술 안 함.(15번 마우스로 재사용) M /13 3’37” 40 0..50 19:29 M /14 3’40” 36’(마취포함) 22:17 21:48 마취시작 ~ 22:24 봉함끝, 봉함소요시간; 7분 M /15 4’50” 20071112 (14시) 43 0.53 45’ 14:32 수술잘됨, section이 덜 된듯. F /16 4’30” (14:50) 24 0.29 45’(마취포함) 15:15 마취잘됨, Good F /17 3’30” (15:35) 28 0.33 17’(칼을 댄순간부터 injury까지) X Sham으로 사용, 척수혈관이 오다가 될올아가는 모양

중이염 조직 western bolt(b-tubulin) - Sample은 지윤 누나가 sample까지 넣어주고 끓여서 roading 만 하면 되게까지 만들어 줌 - 단백질 양도 지윤누나가 계산하여 줌 - 1’, 2’ Ab는 지윤 누나 것을 씀 - 10% gel 사용 Electrophoresis 10% gel : 68V, 31milliamps Transfer 400mA : 2시간 30분 Poneau staining : bubble 확인됨, membrane 밀착 유의!! 1 ‘Ab 1:1000, 4℃ overnight 2’ Ab 1:8000, 1hr, RT - 2’ Ab washing 10min X 3차 중 2차에서 10분을 더해줌 10min exposure M 1-1 1-2 6-1 6-2 5ul 10.2ul 16.36ul 8 21.9 다시 5% femto 사용으로 해봤으나 결과가 안나옴 - Membrane과의 표식을 하지 않아서 확인 불가; 다음 부터는 표시할것, 또한 membrane에 날짜, 1차 항체, exposure시간, pemto 사용시 조건 등 표시 할것

Mice perfusion and fixation 11월 8일 7번 mouse 마취(17:17), 8번 mouse 마취(7:45) 7번 척수를 PFA에 담금(18:12), 8번 척수를 PFA에 담금(19:45) -> mice perfusion 한마리 당 perfusion부터 cord분리까지 1시간 소요 11월 10일 7, 8번 mice cord embedding 9번 cord에 피멍이 들어 있음 - 8-7 embedding 시부터 입김을 불어 기포를 제거하나 구겨짐 11월 13일 15,16,17번 mice perfusion and fixation 14시 43분 - 15 mouse 마취시작 15시 15분 – 16 mouse 마취시작 15시 35분 – 17 mouse 마취시작 -> 개복 순간부터 척수 분리까지 35분 소요, 8분 30초에 꼬리가 말리는 현상을 보임 PFA로 바꾼 후 3분 50초대가 되면 꼴리가 말림 11월 14일 15, 16, 17번 mice embedding and morphology 관찰 15번 mouse(hemisection model) - cervical의 신경돌기의 간격은 1mm이고 총 cervical의 총 길이는 0.7cm, 총 7개의 신경돌기. - thoracic의 총길이는 20mm, 12개까지 셀 수 있고 이후는 뭉게짐, 간격은 0.1cm, cervical보다 얇음 17번 mouse(sham-operated control, the animal underwent a T10 laminectomy with hemisection) - 듀라를 벗기기전 : brain stem쪽으로 2mm, 밑으로 1mm에 걸쳐 피멍이 들어있고 약간 얇아졌음. - 듀라를 벗기고 나니 멍이 사라졌음 하지만 section으로 확인한바 척수 중앙이 충혈되어 있음.

Mouse 현황 현재 있는 수컷 마릿수(male) 24 현재 있는 암컷 마릿수(female) 4 WT descendant generation 1세대 2세대 3세대 gender male female old(1년 이상) 1 16 adult(15주 초과 1년미만) 2 3 Young 11~15주 8~10주 5 7주 6주 5주 5 week 미만 25 K-HSP descendant 12 10 47 55 MMP descendant 11 18 9 이외에 GPX1 Ko- 암컷 07.09.28일생 4마리, GPX1 Ko- 숫컷 07.09.28일생 4마리, Catalase Ko-암컷 07.10.04일생 4마리, Catalase Ko-숫컷 07.10.04일생 4마리