오염지표 미생물 검사 강원도가축위생시험소.

Slides:



Advertisements
Similar presentations
산과 염기의 성질. 산 또는 염기가 리트머스시험지나 지시약의 색을 어떻게 변화 시키는가를 알아본다. 산의 금속 또는 어떤 산의 염과 어떻게 반응하는가를 조사하 여 보고 산, 염기의 화학적 성질을 알아본다. 실험목적 실험기구 및 시약 시험관, 시험관 받침대, 스포이드,
Advertisements

식품분석Ⅰ - 조단백정량 3.1 원리 - 단백질은 질소 (N) 를 함유한다. 즉, 식품 중의 단백질을 정량할 때에는 식품 중의 질소 양을 측정한 후, 그 값에 질소계수 를 곱하여 단백질 양을 산출한다. 질소계수 : 단백질 중의 질소 함량은 약 16% 질소계수 조단백질 (
Ⅱ 세포의 주기와 생명의 연속성 Ⅱ 세포의 주기와 생명의 연속성 - 1. 세포주기와 세포분열.
처음 페이지로 이동 Vancomycin-resistant enterococci (VRE) 와 vancomycin-resistant Staphylococcus aureus (VRSA) 선별을 위한 배지 개선 세브란스병원 진단검사의학과 미생물계 안 철 희.
Clostridium difficile 정량 배양과 반정량 배양의 비교 진단검사의학과 미생물계 박상준.
2-4 과학 탐구 정은혜, 이상은, 김동희. 탐구 동기 더운 여름날 음식이 부패하는 것을 보고 어떤 음식에 가장 곰팡이가 많이 생길지 궁금해져서 탐구를 시도 하게 되었다.
▣ 세균의 배양과 동정 1. 검사재료의 채취, 보존 및 검체에 따른 배지선택에 대하여 설명한다.
실험관찰 : 곰팡이 영재학급 5학년 신 교 빈.
3M/HUKO/FSA/UNI. 식품미생물검사 위탁관리 제안서 FSAKOREA
광학 현미경 조직검사 시편 작성방법.
염기 비누화 반응 (Saponification)
배지의 종류 및 조제법 배지란? 배지(culture medium)는 미생물이 필요로 하는 각종 영양소를 골고루 함유 하는 물질이다. 미생물의 영양소에는 탄소원, 질소원, 비타민류, 무기염 등이 있다. 미생물의 종류와 성질에 따라 사용하는 배지의 조성은 각각 다르다.
6. 우유 및 유제품의 미생물학적 시험 시료 채취 2. 총균수 측정(직접현미경 계수법)
종양표지자 CA19-9 검사 - Cobas Core 와 Elecsys 의 비교 -
제 7 장 함수 사용을 통해 엑셀 정복하기.
고장률 failure rate 어떤 시점까지 동작하여 온 품목이 계속되는 단위기간내에 고장을 일으키는 비율(횟수). 고장률은 확률이 아니며 따라서 1 보다 커도 상관없다. 고장이 발생하기 쉬운 정도를 표시하는 척도. 일반으로 고장률은 순간고장률과 평균고장률을 사용하고 있지만.
센서 2. pH 센서 안동대학교 물리학과 윤석수.
미생물학 실험.
PET (Peritoneal Equilibration Test)와 Kt/V 검사의 소개
미생물 배양 관련 교육 해남군농업기술센터 김대성.
ATP를 이용한 위생관리방안 - 실시간 위생상태 모니터링 - FSA KOREA, Co.
동의대학교 생명공학과 생물정화공학 폐 수 처 리 공 학 Wastewater Engineering; Treatment, Disposal, and Reuse 9장 생물학적 단위공정 – (2) 변 임 규
몰리브덴 블루법에 의한 인산염 인(PO4-P) 정량
요오드법 적정의 응용 생활하수의 BOD 측정.
실험의 목적 산화-환원적정법의 원리 이해 산화-환원 반응식의 완결(산화수) 노르말 농도 및 당량 과망간산 용액의 제조법
Clostridium difficile 연관 설사 진단을 위한 Toxin A/B immunoassay의 유용성 평가
3M 페트리필름 이란 ? 식품 및 환경에 존재하는 각종 미생물 (일반세균, 장내세균, 대장균 및 대장균군, 진균, 황색포도상구균 등)을 검사하기 위한 건조필름배지(Dry rehydratable film media)는 얇은 필름에 영양성분, 수용성 겔 및 균 indicator(TTC.
2% Ogawa medium+ Middlebrook 7H9-B broth
KNU Microbial Biotechnology Laboratory
병원성 미생물 분리· 동정 강원도가축위생시험소.
4-6. 광합성 작용(1).
TB Ag MPT64 미생물파트 이유희
(생각열기) 옷가게에서 옷을 살 때와 옥가게 밖으로 나와 서 옷을 볼 때 옷 색이 달라져 보이는 이유는?
라디칼 소거활성 측정 DPPH assay.
학습 주제 p 밀도를 이용한 혼합물의 분리.
체 세 포 분 열 배 수 경 중3 과학.
항바이러스 한약제 검사 바이러스팀 최유정, 이대희.
결핵 진단을 위한 COBAS AmplicorTM 검사의 유용성
Catalase 음성 그람양성구균의 동정 원주의대 어 영.
중화반응 구현고등학교 지도교사 :이병진.
Volhard 법에 의한 염화물 시료의 침전적정 (Determination of Chloride by a precipitation titration based on the Volhard Method)
효소를 이용한 간 기능 검사.
6-10. 앙금을 만드는 이온을 찾아라! 학습 주제 < 생각열기 >
(Titration of magnesium with EDTA)
1. 2진 시스템.
식물유래 천연항균물질의 항균력 측정 김 영 민 도 은 표 박 병 주.
USP vs. KP 일반시험법 비교(4).
무게법에 의한 강철 속의 니켈 정량 (Gravimetric Determination of Nickel in steel)
영양소와 검출 시약의 정색 반응을 말할 수 있다. 2. 검출 시약을 이용해 음식물 속의 영양소 를 검출할 수 있다.
Lecture 3 – 농도계산 및 식품기사 시험 안내
(생각열기) 요리를 할 때 뚝배기로 하면 식탁에 올라온 후에도 오랫동 안 음식이 뜨거운 상태를 유지하게 된다. 그 이유는?
Ch. 3. 시료 채취 및 처리 2-1. 시료의 종류 및 고려사항 시료의 종류: 고려사항:
물의 전기분해 진주중학교 3학년 주동욱.
Macromolecule analysis Ⅰ
DNA의 구조와 역할 (1) DNA : 이중 나선 구조로 수많은 뉴클레오타이드의 결합으로 이루어져 있다.
은거울 반응.
(생각열기)별의 색깔이 다르게 나타나는 이유는 ? 답 : 별의 표면 온도가 다르기 때문이다.
분별증류 GROUP12 조만기 양나윤 김세인.
결핵균 동정방법의 비교 미생물계 류 희 정.
제 19장 물의 오염도와 오염물질의 종류 김기호 정남진.
이산화탄소 발생실혐 관찰항목 이산화탄소의 색깔 이산화탄소의 냄새 촛불의 변화 석회수의 변화 ?
(Titration of magnesium with EDTA)
수치해석 ch3 환경공학과 김지숙.
지시약의 작용원리 실험방법 1. 지시약의 최대흡수파장 측정
아스피린(Aspirin)의 정량.
콘크리트(산업)기사 실기 작업형 시험 대비 동영상포함
캐비테이션(CAVITATION) 기포의 생성 파괴 기포의 발생
공예염색과정 형지스크린 Craft dyeing course paper stencil printing.
고병원성 조류인플루엔자(HPAI) 검사과정
안전한 수산물 취급 위생 관리
Presentation transcript:

오염지표 미생물 검사 강원도가축위생시험소

목 차 가. 낙하세균 검사 나. 일반세균 검사 다. 대장균 검사 라. 대장균군 검사

-> 검출시 식품의 제조, 가공 또는 저장 중에 용어의 정의 낙하세균수 : 작업장 오염도 모니터링 일반세균수 : 식품중의 신선도 감별 대장균군 : 환경관리상의 위생척도 (자연계에 널리 분포) -> 검출시 비위생적인 처리를 의미 ◈ 대장균군이란 ? 장내에 서식하는 그램음성 간균.유당을 분해하여 산과 가스를 발생하 는 호기성·통성 혐기성균. 대 장 균 : 대장균군의 대표적인 세균. 분변오염의 지표 -> 검출시 식품의 제조, 가공 또는 저장 중에 직·간접적으로 분변에 오염된 것을 의미

권 장 기 준 낙하세균 1 1. 오염작업구역 : 낙하세균수(생균수) 100 개 이하 2. 준청결작업구역 : 낙하세균수(생균수) 50 개 이하 3. 청결작업구역 : 낙하세균수(생균수) 30 개 이하 낙하진균수(곰팡이·효모) 10 개 이하 ** 단, 측정은 작업중에 (법적인 규제사항은 아님)

낙하세균 검사 낙하세균 2 표준한천평판배지를 넣은 페트리접시 2~3개 사용 세균집락수를 count하고 그 평균치를 구한다. 37℃(±1.0 ℃)에서 48시간(± 3시간)동안 배양 작업중 바닥에서 80-100 cm 높이에 놓고 뚜껑을 열어 5분간 수평으로 방치한 후 뚜껑을 덮는다. 표준한천평판배지를 넣은 페트리접시 2~3개 사용

낙하진균 검사 낙하세균 3 포도당한천배지(SDA) 2~3개 사용 (클로람페니콜 또는 테트라싸이클린 50-100mg/L 첨가) 진균집락수를 count하고 그 평균치를 구한다 23℃(±2.0 ℃)에서 7일간 배양 바닥에서 80-100 cm 높이에 놓고 뚜껑을 열어 20분간 수평으로 방치한 후 뚜껑을 덮는다 포도당한천배지(SDA) 2~3개 사용 (클로람페니콜 또는 테트라싸이클린 50-100mg/L 첨가)

일반세균 검사 (표준평판배양법, aerobic plate count) 일반세균 1 일반세균 검사 (표준평판배양법, aerobic plate count) 중 첩 : 집락의 확산을 억제하기 위하여 표준한천배지 3-5ml을 가한다. 배지 분주 : 배지(Standard plate count agar) 15ml을 분주 후 회전하여 시료와 배지를 잘 섞고 응고시킴 단계 희석 : 10진 희석법으로 희석, 각 단계 희석액(10-2, 10-3, 10-4) 1ml씩 멸균 페트리디쉬 (2매이상)에 무균적으로 취한다. 시료 제조 : 채취한 시료 10ml(g)과 희석액 90ml 을 혼합 배 양 : 거꾸로 하여 35 ± 1.0 ℃ 에서 약 48시간 배양

일반세균수 계산 일반세균 2 유효 평판 선택 : 평판당 25-250 (또는 30-300)개의 집락을 생성한 평판을 선택 기록 : 유효숫자 두자리까지 기록 계산 : 3번째 자리의 숫자가 6이상과 4이하인 경우 : 반올림 3번째 자리의 숫자가 5인 경우 : 둘째 자리수가 홀수일 때는 반올림, 짝수일 경우 버림 N = ∑ C / <(1 X n1) + (0.1 x n2)> X d ∑ C = 모든 평판에 계수된 집락수의 합 n1 = 첫번째 희석배수에서 계수된 평판배지수 n2 = 두번째 희석배수에서 계수된 평판배지수 d = 첫번째 희석배수에서 계수된 배지의 희석배수 구 분 희석배수 CFU/g(ml) 1 : 100 1 : 1,000 집락수 232 33 24,000 244 28 N = (232+244+33+28) / < (1X2) + (0.1X0.2) > X 10-2 = 537 / 0.022 = 24,409 = 24,000

일반세균 검사 (건조필름법) 일반세균 3 용 도 : 일반세균, 대장균 및 대장균군, 진균, 살모넬라균, 황색포도상구균, 등의 신속분석 원 리 : 얇은 필름에 영양소, 수용성 겔 및 균체 지시약들을 특수 코팅시켜 시료를 접종, 배양시키면 그 지시약에 의한 색깔 변화로 판정 특 징 - 정성 및 정량분석 기능 - 일정 배양시간이 필요하나 기존 평판배양법에 비해 신속 - 정확한 결과 판정이 어려울 경우도 있음

일반세균 4 종류 구조 종류 배양온도 (℃) 배양시간 (hr) 판 정 일반세균 32~36 24-48 붉은색 대장균군 24 붉은색, 기포 대장균 푸른색, 기포 속성 대장균군 6-20 노란색, 기포 장내세균 황색포도상구균 35(62) 24(1) 붉은색, 핑크색환 효모/곰팡이 21~25 72-120 효모 : 小,핑크~초록색 곰팡이: 大,불분명한외곽 살모넬라균 32-35 흑색

실험방법 일반세균 5 시료 준비 : 시험용액 제조 후 단계희석 (10배 희석) 집락수계수 : 필름 상 붉은 집락수 배 양 : 36℃ incubator에서 24-36시간 접 종 : 각 단계의 희석액을 1ml 씩 petrifilm에 떨어뜨린 후 필름을 덮어주고 누름판으로 눌러준다. 시료 준비 : 시험용액 제조 후 단계희석 (10배 희석) 세균수 산출 : 희석배수 X 집락수

사용방법 일반세균 6 상부필름을 걷어 올리고 하부필름의 중앙에 시료 1ml를 수직으로 접종한다. 대장균군과 대장균 배지는 중앙의 약간 윗부분에 접종한다. (접종과정에서 기포발생 방지) 상부필름을 부드럽게 위에서 아래로 덮는다. 이때 상부필름을 빨리 놓게 되면 기포가 생겨서 결과가 불명확해진다 균체수 = 16 배지내의 붉은색 염색지시약이 균체들을 염색. 균체의 크기에 관계없이 배지내에 염색된 모든 붉은색 균체들을 측정. 누름판을 필름상부에 올려놓고 살짝 눌러준다. (원이 형성되면 완료) 30초~60초 후에 겔화가 완료되면 배양기로 옮겨준다.

대장균·대장균군 검사 최확수법 (MPN, most probable number) 대장균수(E.coli ) & 대장균군수 1 대장균·대장균군 검사 최확수법 (MPN, most probable number) 1차판정 : 가스발생 시험관을 대장균군 양성으로 한다. 배 양 : 35±1℃에서 48±3시간 접 종 : 각 희석배수를 3개(또는 5개)의 BGLB (또는 LST배지) 발효관에 접종 희 석 : 시료액을 10진 희석하여 3단계이상 희석

2차판정 : 자외선 조사하에 푸른 형광이 관찰되는 시험관을 대장균수(E.coli ) & 대장균군수 2 균수산출 : 최확수표(부표 7 또는 부표 8)에 근거 2차판정 : 자외선 조사하에 푸른 형광이 관찰되는 시험관을 대장균 양성으로 판정 배 양 : 44.5℃에서 24시간 배양 2차접종 : EC-MUG배지(또는 BGLB-MUG, LST-MUG)에 접종 2 % B G L B m E C 발효관 MUG첨가 액체배지 MUG 첨가 평판배지

확인시험 대장균수(E.coli ) & 대장균군수 3 도 말 : 추정시험 양성 시험관을 EMB(MacConkey)배지에 도말 배 양 : 37℃, 24시간 배양 판 정 : 전형적인 집락 확인(금속성의 광택이 있는 집락) 확 인 : 그람염색(음성간균),  MUG 시험: 형광관찰·가스산생, IMViC: + + - -

Eosin Methyl Blue(EMB)Agar MacConkey agar Eosin Methyl Blue(EMB)Agar E.coli 생화학적 시험결과 Gram염색소견

대장균·대장균군 검사 건조필름법 대장균수(E.coli ) & 대장균군수 4 대장균군 대 장 균 - 배지 : 대장균군용 건조필름배지 (coliform) - 양성집락 : 기포가 동반되고 붉은색을 띄는 집락 대 장 균 - 배지 : 대장균용 건조필름배지 (E. coli) - 양성집락 : 기포가 동반되고 푸른색을 띄는 집락 실험방법 : 일반세균 건조필름법과 동일

대장균수(E.coli) & 대장균군수 5 실험결과 (예:대장균필름) 대장균수 = 3 대장균수 = 50 대장균의 대사산물인 Glucoronidase가 배지내의 염색지시약과 반응하여 균체를 푸른색으로 발색. 대사과정에서 CO₂가스를 발생시켜 균체가장자리에 가스방울 동반. 총대장균군의 측정은 가스방울이 붙어 있는 붉은색 균체와 푸른색 균체를 모두 측정.

대장균수(E.coli) & 대장균군수 6 실험결과 (예:대장균군필름) 대장균군수 = 8 대장균군수 = 5 부적절한 균접종방법으로 인하여 인공 가스방울이 발생될 수 있으며 이들은 형태가 불규칙.